【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實驗操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進(jìn)行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9020316  PM kit, C12 & QIAgility, CG1             CNY                                  

9020265  Packaging, foam base, C1x          CNY                                  

9020234  Z-pulley, idler ass., 8 ch. gearbox, Cx8        CNY                                  

9020228  Belt, Y-axis assembly, Cx8            CNY                                  

9239525  Fitting,Peek,10-32,1/16tubing (5)         CNY                                  

9020164  Vacuum Pump (110-120 V), PyroQ24VW           CNY                                  

9232820  Mikrowin data reduction Software              CNY                                  

9232807  Cal. Set for Reader 3 000 12 00           CNY                                  

9236528  Manual, user, QS 4.1 (WW)         CNY                                  

9236486  #Agreement, Plato 3, PM, 1 yr      An agreement for preventive maintenance provides coverage for travel, labor, ａnd parts, plus the cost of consumables required for the maintenance visit. Work carried out during the preventive maintenance visit is fully documented in accordance with GMP/GLP directives. CNY                                  

9236446  Travel Charge, zone A           CNY                                  

9236439  1.0 hr             CNY                                  

9011884  Holder, tip rack 2           CNY                                  

9236982  Power Supply, 400W, BR8, RD v1.0           CNY                                  

9019142  X/Y table, PyroQ96ID           CNY                            【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】      

9019128  Camera MX5, PyroQ96ID            CNY                                  

9019127  Heating block, PyroQ96ID           CNY                                  

9019027  Pin, piercing, EZ1          CNY                                  

9019026  Worktable, side wall, right, EZ1xl         CNY                                  

9018959  Master Mix Block, 5x5ml Tubes          CNY                                  

9018952  Reagent Block, 16x0.2ml/1.5ml PCR/FlatBa        CNY                                  

9018941  Adapter, COBAS TaqMan 48 Plates             CNY                                  

9015617  Precision Pipetting Calibration Kit  "The 9015617 Kit comprised

- 9236744 96-Well Microplate FB (24)

- 9238096 Tartazine Powder (25 g)

- 9238264 Handbook"    CNY                                  

9015590  EZ1 RNA Card       Pre-programmed card for EZ1 RNA purification protocols  CNY                                  

9015533  Cover, back ,type C              CNY                                  

9015520  Door Lock Upgrade Kit, BR EZ1          CNY                                  

9014187  Tube Holder, STS, 5ml, 16 pos (6)              CNY                                  

9014154  RoboVac, Base, BR8 RD, v4.2      This is the new version containing the locking mechanism see ISI note 51b-Jenith       CNY                                  

9013993  Belt, Y-drive, Mounting Tool, BR8000          CNY                                  

9021177  Controller, Z Axis, VRA, DCU              CNY                                  

9021162  Output Rack, 96 pos, DCU           CNY                            【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】      

9021058  Door Assy, Upper Left, DCU        CNY                                  

9021013  Controller, Theta Rotary, DCU             CNY                                  

QR20-123      10%SDS溶液       100ml                                

QR20-124      PBS 500ml                                

QR20-125      PBST      500ml                                

QR20-126      TBS 500ml                                

QR20-127      TBST      500ml                                

QR20-128      Tris-Glycine   500ml                                 【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】

QR20-129      Tris-Glycine SDS   500ml                                

QR20-130      1.5M Tris-Cl(pH8.8)      500ml                                

QR20-131      0.5M Tris-Cl(pH6.8)      500ml                                

QR20-132      超純dNTP(2.5mM each)      0.5ml                                 

QR20-133      超純dNTP(2.5mM each)      1ml                             

QR20-134      超純dNTP(10mM each）    250μl                                

QR20-135      超純dNTP(10mM each）    500μl                                

QR20-136      超純dATP(100mM)      0.5ml                                 

QR20-137      超純dGTP(100mM)     0.5ml                                 

QR20-138      超純dCTP(100mM)      0.5ml                                 

QR20-139      超純dTTP(100mM)      0.5ml                                 

QR20-140      RNase A 溶液（10mg／ml）      50μl                                 

QR20-141      Proteinase K（20mg／ml）  1ml                             

QR20-142      6 x Loading Buffer 5ml                             

QR20-143      RNase-Free Water  10ml                                  

QR20-144      紅細(xì)胞裂解液       100ml                                 【內(nèi)臟脂肪細(xì)胞】

QR20-145      水飽和酚       250ml                                

QR20-146      Tris飽和酚    250ml                                

QR20-147      5 x TBE  500ml                                

QR20-148      50 x TAE 50ml                                  

QR20-149      Lyticase   150mg                               

QY-L0001       阿魏酸1135-24-6  Ferulic acid     1135-24-6       20mg                   

QY-L0002       阿魏酸乙酯4046-02-0  Ethyl 4＇-hydroxy-3＇-methoxycinnamate 4046-02-0      20mg                   

QY-L0003       阿魏酸松柏酯63644-62-2    Coniferyl ferulate    63644-62-2     20mg                   

QY-L0004       異阿魏酸537-73-5       3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid     537-73-5 20mg