【成人真皮成纖維細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【成人真皮成纖維細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【成人真皮成纖維細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【成人真皮成纖維細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9019188  Mirror, PyroQ96           CNY                                  

1064181  EGFR RGQ PCR Kit (24) IUO             CNY                                  

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9016561  BR MDx DSP Serv.pro Plasticware Kit, V1         CNY                                  

9016505  Rect. Bucket Set (4)             CNY                                  

9016486  Cable Dilutor bus, RS485, Kloehn        CNY                                  

9016288  Cable, RS232, EZ1a              CNY                                  

9019181  PCB 7 - Connection, PyroQ96MD        CNY                                  

9019115  Fan - IPC, PyroQ96ID          CNY                                  

9019101  Rotor-Gene Q Software        CNY                                  

9019079  PyroMark Assay Design SW 2.0 (5)     "All-in-one software for design of both PCR ａnd sequencing primers

Five additional software licenses for PyroMark AssayDesign SW 1.0"       CNY                            【成人真皮成纖維細(xì)胞】   

9019071  PyroMark Thermoplate, PyroQ96MD   Holder for placement of PyroMark Q96 Plate on heat block during annealing step prior to PyroMark Q96 MD analysis.    CNY                                  

9019017  Tray, EZ1xl           CNY                                  

9019008  Reflector, UV lamp, EZ1xl            CNY                                  

9018934  Adapter, 24x5ml flat base Tubes          CNY                                  

9016014  X-Motor DC, Gear, 20V        CNY                                  

9016003  BioSprint 15 tube tray    "he 5-tube strips sit on this tray during the run.

see page 33 of the user manual for visuals"  CNY                                  

9015972  Tube Holder, STS MDx, 15 mm (12)          CNY                                  

9015910  Luminex Maintenance Kit             CNY                                  

9015862  EZ1 DNA PRFN Card    Pre-programmed card for BioRobot EZ1 paraffin section protocols    CNY                                  

9015687  Rings (10), pinching, 4.5/2.7 mm         CNY                                  

9015613  Cable, Interface, 3000 mm, PC to X-main           CNY                                  

9015606  Upgrade, LiquiChip IS 2.x            CNY                                  

9015536  Door, complete             CNY                                  

9019165  Lead screw - Y, PyroQ96MD        CNY                                  

9019163  Reagent chamber lid, PyroQ96MD              CNY                                  

9013928  Channeling Adapter BR8000          CNY                            【成人真皮成纖維細(xì)胞】   

QR20-60 DL2000   100次                                

QR20-61 DL5000   50次                                 

QR20-62 DL5000   100次                                

QR20-63 100bp Ladder  50次                                  【成人真皮成纖維細(xì)胞】

QR20-64 100bp Ladder  100次                                

QR20-65 200bp Ladder  50次                                 

QR20-66 200bp Ladder  100次                                

QR20-67 1kbp Ladder   10次                                 

QR20-68 1kbp Ladder   50次                                 

QR20-69 DM15000       50次                                 

QR20-70 DM15000       100次                                

QR20-72 超純水    10次                                 

QR20-73 Taq DNA Polymerase     500U                                  

QR20-74 Taq DNA Polymerase     1000U                                

QR20-75 2 x Taq MasterMix 1ml                             

QR20-76 2 x Taq MasterMix 3ml                             

QR20-77 Pfu DNA Polymerase     250U                                  

QR20-78 Pfu DNA Polymerase     500U                                  

QR20-79 2 x Pfu MasterMix 1ml                             

QR20-80 2 x Pfu MasterMix 3ml                              【成人真皮成纖維細(xì)胞】

QR20-81 HotStar Taq DNA Polymerase       125U                                  

QR20-82 HotStar Taq DNA Polymerase       500U                                  

QR20-83 2 x HotStar Taq MasterMix   1ml                             

QR20-84 2 x HotStar Taq MasterMix   3ml                             

QR20-85 Oligo(dT)15    500μl(10μM)                             

QR20-86 M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶  10000U                              

QR20-87 M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶  50000U                              

QR20-88 M-MLV cDNA鏈合成試劑盒      20次                                 

QR20-89 M-MLV cDNA鏈合成試劑盒      50次                                 

QR20-90 Thermo M-MLV Reverse Transcriptase       10000U                              

QR20-91 Thermo M-MLV Reverse Transcriptase       50000U