【前列腺平滑肌細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【前列腺平滑肌細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【前列腺平滑肌細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【前列腺平滑肌細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9019875  Cover, main, silver, RGQ              CNY                                  

9019836  IPC Hard Drive PCA6751,  PyroQ96ID             CNY                                  

9019769  Valve, shutoff, V2, QX          CNY                                  

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QKG-124              規(guī)格：5ml                                

QKG-125       UltraPure dNTP Mix (10 mM each)      規(guī)格：1ml                                

QKG-126       Random Primer      規(guī)格：50μl                              

QKG-127       Oligo (dT)15 Primer      規(guī)格：50μl                              

QKG-128       高純度質(zhì)粒小提試劑盒 PurePlasmid Mini Kit    規(guī)格：50次                              

QKG-129              規(guī)格：200次                            

QKG-130              規(guī)格：1000次                                 

QKG-131       QuickPure Plasmid Mini kit 買CW2619S，贈(zèng)天堂傘；買CW2619M，贈(zèng)羅技無線光電鍵鼠套餐     規(guī)格：50次                            

QKG-132              規(guī)格：200次                             【前列腺平滑肌細(xì)胞】

QKG-133       高純度質(zhì)粒大提試劑盒 PurePlasmid Maxi Kit   規(guī)格：10次                              

QKG-134       高純度質(zhì)粒中提試劑盒 PurePlasmid Midi Kit    規(guī)格：50次                              

QKG-135       酵母質(zhì)粒小提試劑盒 Yeast Plasmid Mini Kit     規(guī)格：50次                              

QKG-136       金牌超量無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 GoldHi EndoFree Plasmid Maxi Kit  規(guī)格：2次                                

QKG-137              規(guī)格：10次                              

QKG-138              規(guī)格：50次                              

QKG-139       金牌超量無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒 GoldHi EndoFree Plasmid Midi Kit  規(guī)格：10次                              

QKG-140       無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒 EndoFree Plasmid Midi Kit      規(guī)格：50次                              

QKG-141       無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒 EndoFree Plasmid Mini Kit      規(guī)格：50次                              

QKG-142       快速瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 Gel Extraction Kit      規(guī)格：50次                              

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QKG-145       微量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 Gel Extraction Micro Kit    規(guī)格：50次                              

QKG-146       大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 MaxiGel Extraction Kit      規(guī)格：50次                              

QKG-147       聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒 PolyGel Extraction Kit       規(guī)格：50次                              

QKG-148       快速DNA產(chǎn)物純化試劑盒 DNA Clean-up Kit   規(guī)格：50次                               【前列腺平滑肌細(xì)胞】

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QKG-151       微量DNA產(chǎn)物純化試劑盒 DNA Clean-up Micro Kit       規(guī)格：50次                              

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QKG-153       植物基因組DNA提取試劑盒 Plant Genomic DNA Kit     規(guī)格：50次                              

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