【卵巢成纖維細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開(kāi)的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開(kāi)后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類(lèi)的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線(xiàn)燈管和HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【卵巢成纖維細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說(shuō)明，具體詳細(xì)請(qǐng)見(jiàn)細(xì)胞附帶說(shuō)明書(shū)

 二、客戶(hù)自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長(zhǎng)方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【卵巢成纖維細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀(guān)察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

 如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀(guān)察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀(guān)察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀(guān)察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【卵巢成纖維細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)和銷(xiāo)售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷(xiāo)售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015186  Tip Guard, M96            CNY                                  

9015094  Vacuum Manifold Top, SBS          CNY                            【卵巢成纖維細(xì)胞】   

9015021  Tubing, retractable tubing, DISU, BR8 RD          CNY                                  

1031586  Buffer TCL, 2x (8,5/15),G           CNY                                  

1027986  Buffer MRL (90/125),KG             CNY                                  

62724     EZ1 DSP Virus Kit (48)  CE-IVD Certified Kit for Extraction of DNA ａnd RNA Viruses from Plasma ａnd Serum. To be used in combination with EZ1 DSP Instrument (SAP 9001360) ａnd EZ1 DSP Virus Card (SAP 9017707). Available Input Volumes 100/200/400 µl, selectable elution volumes 60/90/120/150 µl. Processing time for 6 samples 45 Minutes.      CNY                                  

9243521  QIAlink, Maintenance / Support Agreement  Support for QIAlink interface with LIMS system. Includes yearly licensing fees, maintenance cost ａnd software updates. Labor ａnd travel included.   CNY                                  

9014405  Connecting plate, BR3000-RapidPlate          CNY                                  

9014313  BGR Bottle Holder Rotor              CNY                                  

9018152  Cable, eluate drawer, Qsym          CNY                                  

9018151  Eluate drawer, Qsym            CNY                                  

9018141  Heated shaker, Qsym            CNY                                  

9018138  PCB, control, et/hs, Qsym            CNY                                  

9018127  Motor, x, extractor, Qsym            CNY                                  

9018088  Cooling adapter, tubes, 2 ml, Qsym             CNY                                  

9018085  Cooling adapter, MTP, RB, Qsym         CNY                                  

9018081  Software Package QIAplex MDD         CNY                                  

9017853  CD, User Manual QIAcube           CNY                            【卵巢成纖維細(xì)胞】   

9017699  EX.UNIT, RCS Incubator Tower (65°)        CNY                                  

9015148  Z-Module 300 µl, BR8 RD            CNY                                  

9015072  EX.UNIT, Syringe Pump Plato 3000 (7135)        CNY                                  

9015064  Shakerplate, autom., BR8 RD              CNY                                  

9019731  Board, A/D, V2, QX             CNY                                  

9001550  Rotor-Gene Q 2plex Platform              CNY                                  

9013723  Motor-X, RCS1            CNY                                  

9013676  Drive Unit MP Holder LH, Shaker BR8000          CNY                                  

9013675  Shakerplate, autom., BR8000        CNY                                  

9013435  Maintenance Kit BR 9600 (B)        CNY                                  

9013427  Maintenance kit, semi annual, BR9600 (A)          CNY                                  

9019655  Quick lock plug, PyroVW            CNY                                  

9019621  Tip ejector holder (incl. magnet), Cx2          CNY                                  

9019605  Pipettor, spring guard ring (black), Cx2              CNY                                  

9019575  Opto switch, X-axis, Cxx             CNY                                  

QC024    包涵體溶解液       50ml                                  

QC025    蛋白復(fù)性液    100ml                                

QC026    蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA) 1ml                              【卵巢成纖維細(xì)胞】

QC027    PMSF(100mM)      1ml                             

QC028    5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液  250ml                                

QC029    SDS-PAGE電泳液(10X)      100ml                                

QC030    SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 2ml                             

QC031    非變性PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)    2ml                             

QC032    10%過(guò)硫酸銨 1.5ml                                 

QC033    30% 丙烯酰胺 (29:1)   100ml                                

QC034    40% 丙烯酰胺 (39:1)   100ml                                

QC035    0.5M DTT      2ml                             

QC036    10% SDS       50ml                                  

QC037    TEMED  5ml                             

QC038    1M Tris-HCl,pH6.8 50ml                                  

QC039    1.5M Tris-HCl,pH8.8     100ml                                

QC040    Western轉(zhuǎn)膜緩沖液 （20x）     100ml                                

QC041    Western一/二抗稀釋液 100ml                                

QC042    Western封閉液(BSA型）    100ml                                 【卵巢成纖維細(xì)胞】

QC043    Western洗滌液     250ml                                

QC044    Western一抗二抗去除液     250ml                                

QC045    BCIP工作液 50mg/ml  100ul                                 

QC046    NBT工作液 50mg/ml   100ul                                 

QC048    10% Sodium Azide (疊氮鈉) 100ml                                

QC049    Protease Inhibitor  A(廣譜性)     1ml                             

QC050    Protease Inhibitor  B(適用于細(xì)菌)      1ml                             

QC051    Protease Inhibitor  C(適用于哺乳動(dòng)物)     1ml                             

QC052    Protease Inhibitor  D(適用于真菌)     1ml                             

QC053    Protease Inhibitor  E(適用于哺乳動(dòng)物)      1ml                             

QC054    Phosphatase Inhibitor M(廣譜性)  1ml                             

QC055    胰酶細(xì)胞消化液    100ml