【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開(kāi)的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開(kāi)后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類(lèi)的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說(shuō)明，具體詳細(xì)請(qǐng)見(jiàn)細(xì)胞附帶說(shuō)明書(shū)

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長(zhǎng)方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

 如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)和銷(xiāo)售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷(xiāo)售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

4857014  careMP PCR ASSAY             CNY                                  

130905    NeXtal DWBlock AmSO4 Suite            CNY                                  

130821    NeXtal CubicPhase 1w Mo/C 8% µplate (2)        CNY                                  

4523003  artus Infl./H1 LC/RG RT-PCR Kit (24) RUO              CNY                                  

4555063  artus M.tuberculosis LC PCR Kit (24) CE           CNY                                  

4555163  artus M.tuberculosis TM PCR Kit (24) CE          CNY                                  

130805    NeXtal CubicPhase 1w Mo µplate (100)             CNY                            【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】   

4518263  artus HCV RG RT-PCR Kit (24) CE             CNY                                  

4514303  artus BK Virus QS-RGQ Kit (24) RUO         CNY                                  

4510035  artus Enterovirus LC RT-PCR Kit (96) PRE         CNY                                  

4513366  artus HI Virus-1 QS-RGQ Kit (72) CE         CNY                                  

129073    MaXtract High Density (25 x 50 ml)            CNY                                  

4505003  artus HAV LC RT-PCR Kit (24) RUO           CNY                                  

4506303  artus HBV QS-RGQ Kit (24) RUO        CNY                                  

80224     AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal Kit (50)             CNY                                  

79306     QIAzol Lysis Reagent (200 ml)            CNY                                  

74903     RNeasy Plant Mini Kit (20)    20 RNeasy Mini Spin Columns, 20 QIAshredder Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                                  

74804     RNeasy Lipid Tissue Mini Kit (50) 50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), QIAzol Lysis Reagent, RNase-free Reagents ａnd Buffers  CNY                                  

27704     QIAprep Spin M13 Kit (50)   For 50 ssDNA preps: 50 QIAprep Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)   CNY                                  

27361     DirectPrep 96 Miniprep Kit (4)      For 4 x 96 plasmid minipreps: 4 DirectPrep 96 Plates, Reagents, Buffers, Flat-Bottom Blocks ａnd Lids, AirPore Tape Sheets, Tape Pads, Elution Microtubes RS, Caps       CNY                                  

19591     Caps for Elution Microtubes (50x8)             CNY                                  

19589     5-hole tube units (256)          CNY                                  

72022     Oligotex Direct mRNA Mini Kit     For 12 mRNA minipreps: 420 ul Oligotex Suspension, Small Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                            【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】   

69985     Grinding Jar Set, S.Steel (2 x 10ml)            CNY                                  

19576     Round-Well Blocks (24) 96-well blocks with 1.2 ml wells, 24 per case. Used for lysis steps in the QIAamp 96 DNA Blood. Required for MagAttract 96 Miniprep Core Kit (PG 2003)   CNY                                  

19092     Pathogen Lysis Tubes L (50), KG         CNY                                  

12165     QIAGEN Plasmid Maxi Kit (100)  100 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers      CNY                                  

10063     QIAGEN-tip 500 (25)    25 columns; 500 µg column capacity   CNY                                  

133285    NeXtalStock TRIS pH 9.0 (200)          CNY                                  

133279    NeXtalStock Succinic acid pH 7.0 (200)             CNY                                  

4504063  Artus Parvo B19 LC PCR Kit (24) CE          CNY                                  

4503003  artus CMV LC PCR Kit (24) RUO        CNY                                  

990399    Spin Column Adapter Rings (25)          CNY                                  

QY112-1 高純度酵母質(zhì)粒大提試劑盒       10T                            

QY113-1 革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒    "100T

"                                 

QY114-1 高純度革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒       "100T

"                                 

QY115-1 革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒中量提取試劑盒    "100T

"                                 

QY116-1 高純度革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒中量提取試劑盒       "100T

"                                 

QY117-1 革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒大量提取試劑盒    10T                            

QY118-1 高純度革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒大量提取試劑盒       10T                            

QY119-1 96普通質(zhì)粒小提試劑盒      "2板

"                                 

QY120-1 96酵母革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒小提試劑盒      "2板

"                                 

QY201-1 小量DNA產(chǎn)物純化試劑盒  "100T

"                                 

QY202-1 小量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒     "100T

"                                 

QY203-1 大量DNA產(chǎn)物純化試劑盒  "100T

"                                 

QY204-1 多功能DNA純化回收試劑盒     "100T

"                                 

QY205-1 小分子量DNA，片段純化回收試劑盒      "100T

"                                  【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】

QY206-1 玻璃奶DNA產(chǎn)物純化回收劑盒  "100T

"                                 

QY301-1 細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒     "100T

"                                 

QY302-1 酵母基因組DNA提取試劑盒     "100T

"                                 

QY303-1 革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒  "100T

"                                 

QY304-1 血液基因組DNA小量提取試劑盒(離心柱型)   "100T

"                                 

QY305-1 血液基因組DNA中量提取試劑盒     "100T

"                                 

QY306-1 血液基因組DNA大量提取試劑盒(離心柱型)   "100T

"                                 

QY307-1 動(dòng)物組織基因組提取試劑盒       "100T

"                                 

QY308-1 細(xì)胞基因組提取試劑盒       "100T

"                                 

QY309-1 植物基因組DNA提取試劑盒     "100T

"                                 

QY310-1 快捷植物基因組DNA提取試劑盒     "100T

"                                 

QY311-1 血液細(xì)胞組織基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY312-1 微量樣品基因組DNA提取試劑盒     "100T

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QY313-1 血液基因組DNA非離心柱型（0.1~20ml）      "100ML

"                                 

QY314-1 血凝塊基因組DNA提取試劑盒  "100T

"                                 

QY315-1 血漿游離基因組DNA提取試劑盒     "100T

"                                  【胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞】

QY316-1 M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒  "100T

"                                 

"                   【胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞】

QY110-1 高純度酵母質(zhì)粒中量提取試劑盒    "100T

"                  

QY111-1 酵母質(zhì)粒大量提取試劑盒  10T