【輸尿管上皮細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開(kāi)的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開(kāi)后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類(lèi)的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【輸尿管上皮細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說(shuō)明，具體詳細(xì)請(qǐng)見(jiàn)細(xì)胞附帶說(shuō)明書(shū)

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長(zhǎng)方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【輸尿管上皮細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

 如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【輸尿管上皮細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)和銷(xiāo)售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷(xiāo)售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9013201  Tubing,release val.auto vac,BR8000 v1.00          CNY                                  

9011704  Cable, PCON98 to AC-box (L1), BR8000            CNY                                  

132603    NeXtal Stock Propylene glycol (50)      100% v/v Propylene glycol - 50mL (4 x 12,5 ml tube) CNY                                  

800302    Heterozygote detection, manual            CNY                                  

132539    NeXtal Stock di-Potassium phosphate (50)   3M di-Potassium hydrogen phosphate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)       CNY                                  

132530    NeXtal Stock Cesium sulfate (50) 1M Cesium sulfate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)      CNY                                  

337842    qBiomarker SYBR ROX FAST Mastermix (12)           CNY                                  

679923    ipsogen RT Kit (33) CE         CNY                                  

180432    GeneRead DNA Library I Core Kit (12)        CNY                                  

159332    Harris UNI-CORE 6.00 mm Punch Kit (4)          CNY                                  

159134    QIAsafe DNA Blood Tubes (50)           CNY                                  

158567    Gentra Puregene Yeast/Bact. Kit (200 ml)            CNY                                  

33213     Xa Removal Resin (2 x 5ml)  2 x 2.5 ml Xa Removal Resin, 3 x 1.9 ml 1 M Tris-Cl, pH 8.0    CNY                            【輸尿管上皮細(xì)胞】   

33203     pQE-30Xa Vector DNA  25 ug pQE-30 Xa Vector DNA      CNY                                  

32915     N-Terminus pQE Vector Set  25 ug each: pQE-9, pQE-30, pQE-31, pQE-32, pQE-40      CNY                                  

31314     Ni-NTA Spin Kit (50)     50 Ni-NTA Spin Columns, Reagents, Buffers, Collection Tubes, 1 ug Control Expression Plasmid       CNY                                  

30950     Glutathione HiCap Matrix  (500 ml)            CNY                                  

30721     Ni-NTA Superflow Cartridges (5x1 ml)        CNY                                  

30230     Ni-NTA Agarose (100 ml)      100 ml nickel-charged resin (max. pressure: 2.8 psi)   CNY                                  

9021219  # LED, 6 µA (12), QX          CNY                                  

9011667  Side panel, technical tower, BR8000            CNY                                  

9240707  Suction Cup Kit, AP              CNY                                  

9240998  QIArent&go - Rent out fee LiquiChip          CNY                                  

676613    ipsogen BAALC ProfileQuant Kit (24)          CNY                                  

676191    ipsogen CBFB-MYH11 D Standards             CNY                                  

9011352  SamTrak positive sample identification         CNY                                  

9011268  Pump, Syringe, Plato 3xxx, (9194)              CNY                                  

330524    RT²  SYBR Green ROX qPCR Mastermix (6)            CNY                                  

871001    KRAS PCR Kit (25)              CNY                            【輸尿管上皮細(xì)胞】   

9011266  Syringe Pump Plato 3000 (7135)          CNY                                  

9011216  AC box, BR8000           CNY                                  

9011119   Valve, 3-way, dilutor, BR8000              CNY                                  

9010979  Plate Turntable Olympus PK80 (inc. brd.)           CNY                                  

QTR-1043      全系列大腸桿菌免疫血清OK     G205      1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1044      全系列大腸桿菌免疫血清OK     E65  1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1045      全系列大腸桿菌免疫血清OK     E57  1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1046      全系列大腸桿菌免疫血清OK     E6811     1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1047      全系列大腸桿菌免疫血清OK     E145       1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1048      全系列大腸桿菌免疫血清OK     G1253     1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1049      全系列大腸桿菌免疫血清OK     Abbotstown    1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1050      全系列大腸桿菌免疫血清OK     P16  1ml  玻片凝集試驗(yàn)                     【輸尿管上皮細(xì)胞】

QTR-1051      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V142       1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1052      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V189       1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1053      全系列大腸桿菌免疫血清OK     E4   1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1054      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V17 1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1055      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V50 1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1056      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V79 1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1057      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V165       1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1058      全系列大腸桿菌免疫血清OK     V113       1ml  玻片凝集試驗(yàn)                    

QTR-1059      全系列大腸桿菌免疫血清K91    1ml  玻片凝集試驗(yàn)                           

QTR-1060      全系列大腸桿菌免疫血清K89    1ml  玻片凝集試驗(yàn)                           

QTR-1061      全系列大腸桿菌免疫血清K103  1ml  玻片凝集試驗(yàn)                           

QTR-1062      全系列大腸桿菌免疫血清K87    1ml  玻片凝集試驗(yàn)                           

QTR-1063      腸產(chǎn)毒性大腸桿菌診斷試劑盒    60    乳膠凝集試驗(yàn)                           

QTR-1064      腸產(chǎn)毒性大腸桿菌診斷試劑盒    60    乳膠凝集試驗(yàn)                           

QTR-1065      腸產(chǎn)毒性大腸桿菌診斷試劑盒    60    乳膠凝集試驗(yàn)                           

QTR-1066      腸產(chǎn)毒性大腸桿菌診斷試劑盒    60    乳膠凝集試驗(yàn)                            【輸尿管上皮細(xì)胞】

QTR-1067      禽流感病毒H5N3分型抗原 1ml  血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)                          

QTR-1068      禽流感病毒H5N1分型抗原 1ml  血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)                          

QTR-1069      禽流感病毒H5N2分型抗原 1ml  血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)                          

QTR-1070      禽流感病毒H7N2分型抗原 1ml  血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)                          

QTR-1071      禽流感病毒H7N7分型抗原 1ml  血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)                          

QTR-1072      禽流感病毒H5N1分型血清 0.5ml      血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)                          

QTR-1073      禽流感病毒H5N2分型血清 0.5ml      血凝試驗(yàn)/凝集抑制試驗(yàn)