【直腸粘膜上皮細胞】下面是細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當特別小心操作，并選擇適當?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【直腸粘膜上皮細胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【直腸粘膜上皮細胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養(yǎng)代理品牌

細胞培養(yǎng)代理品牌

【直腸粘膜上皮細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9240526  Cable, Motor Axis #3, Capper I/O, AP98             CNY                            【直腸粘膜上皮細胞】      

9240500  Fluidic Valve, Reagent Pump, AP          CNY                                  

9240240  Collet nut, TR        CNY                                  

9240099  #Re-Installation, BR M48      The Re-Installation, BR M48 facilitates quick implementation of system back into lab routine by minimizing  instrument set-up phase. It covers hardware ａnd software check of instrument ａnd provides user with operator refesher overview.  Re-installation includes labor ａnd travel costs. Re-installation performance process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.     CNY                                  

9239855  Compressor, v2.0          CNY                                  

9019494  Measurement Gauge Kit, RCS              CNY                                  

9238863  LiquiChip, Premium Agreement     The Premium Cover Agreement LiquiChip provides full service coverage for the LiquiChip workstation. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a priority response time of 24 hours (1 working day).     CNY                                  

5000-1251      Motor Control PCB, DML2          CNY                                  

5000-1513      H-Spring, DML2           CNY                                  

6000-3119      Plate Washer I - Rinse Cap Assembly           CNY                                  

5000-1417      Overlay 099A, VTX2            CNY                                  

5050-1078      LIS Information Package             CNY                                  

9240717  Lead Screw Assy, Axis 5, TR, AP        CNY                                  

9240703  O-Ring, Valve, Reagent Pump, AP        CNY                                  

9020806  Rotor Timing Calibration Dye, RGQ            CNY                                  

338134    Microbial DNA Positive Control           CNY                                  

288105    bactotype Mycoplasma Mg/Ms PCR Kit (96)              CNY                            【直腸粘膜上皮細胞】      

275002    flocktype NDV Ab (2)           CNY                                  

285515    cador C. burnetii PCR Reagent (96)             CNY                                  

285115    cador TKP PCR Reagent (96)              CNY                                  

9001901  #QIAgility (PC) Priority QIAgility (PC) Priority includes the QIAgility instrument, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years. One on-site pipetting head service is included for each year of the warranty; 2 pipetting head services in total. Service package includes all parts, labor ａnd travel costs with an on site service response time of 48 hours (2 working days). Performance of the installation ａnd service visits are documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents.       CNY                                  

800331    PCR Amplification         CNY                                  

9019489  ZLV PLATE ADAPTOR BIOHIT          CNY                                  

9019544  ZLV Skirt, low raw white 2427, CASx         CNY                                  

9019580  ZLV Reed Switch assembly, C34          CNY                                  

9020583  X-Belt, DML3000 185 Teeth         CNY                                  

9020592  Optical Head Assembly, DML 3000              CNY                                  

9021015  Encoder, Z Axis, VR, DCU           CNY                                  

9013209  Cabling kit, 5V/24V, BR8000         CNY                                  

9013189  Wheel, retractable tubing, dispenser, BR              CNY                                  

9011757  Reagent holder, 1-trough 20 ml     Holder for accommodating a single disposable trough (20 ml) on the worktable; must be used with the reagent holder tray   CNY                                  

132632    NeXtal Stock Potassium formate (50)   10M Potassium formate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)     CNY                                  

761125    PAXgene Blood DNA Tube (100)  100 PAXgene Blood DNA Tubes   CNY                            【直腸粘膜上皮細胞】      

QTR-919 癌胚抗原(CEA)檢測卡  1T   20T、50T/盒                      

QTR-920 前列腺特異性抗原(PSA)檢測卡  1T   20T、50T/盒                      

QTR-921 布病阻斷ELISA抗體檢測試劑盒                                         

QTR-922 賈弟蟲抗原檢測試紙條                                          【直腸粘膜上皮細胞】

QTR-923 A型輪狀病毒ELISA抗原檢測試劑盒                                         

QTR-924 A型輪狀病毒抗原檢測試紙條                                      

QTR-925 西尼羅河熱阻斷ELISA抗體檢測試劑盒                                     

QTR-926 小球隱孢子蟲檢測試劑條                                      

QTR-927 A型流感阻斷ELISA抗體檢測試劑盒                                         

QTR-928 豬胸膜肺炎放線桿菌iELISA抗體檢測試劑盒（10,12型）                                      

QTR-929 豬胸膜肺炎放線桿菌iELISA抗體檢測試劑盒（1,2,9,11/3,6,8,15/4,5,7型）                                   

QTR-930 豬偽狂犬病病毒(全)抗體檢測試劑盒                                   

QTR-931 豬偽狂犬gB-ELISA抗體檢測試劑盒                                    

QTR-932 豬偽狂犬gE-ELISA抗體檢測試劑盒                                    

QTR-933 非洲豬瘟抗原檢測ELISA試劑盒                                         

QTR-934 非洲豬瘟cELISA抗體檢測試劑盒                                       

QTR-935 非洲豬瘟病毒抗體檢測試紙條                                      

QTR-936 豬布病iELISA抗體檢測試劑盒                                    

QTR-937 副豬嗜血桿菌iELISA抗體檢測試劑盒                                        

QTR-938 流感iELISA抗體檢測試劑盒                                         【直腸粘膜上皮細胞】

QTR-939 雙抗夾心法豬圓環(huán)病毒抗原檢測試劑盒                                      

QTR-940 PCV-2 IgG/IgM抗體檢測試劑盒                                   

QTR-941 PCV-2 IgG抗體檢測試劑盒                                   

QTR-942 豬丹毒iELISA抗體檢測試劑盒                                    

QTR-943 豬肺炎支原體ELISA抗體檢測試劑盒                                         

QTR-944 豬細小病毒iELISA抗體檢測試劑盒                                    

QTR-945 豬細小病毒ELISA抗原檢測試劑盒                                     

QTR-946 豬傳染性胃腸炎/豬冠狀病毒檢測試劑盒（Porcine Coronavirus(PRCV/TGEV)）                                   

QTR-947 豬傳染性胃腸炎和冠狀病毒二聯(lián)抗體檢測試劑盒                                      

QTR-948 豬冠狀病毒ELISA抗體檢測試劑盒                                     

QTR-949 豬傳染性胃腸炎ELISA抗體檢測試劑盒