【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實驗操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進(jìn)行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9022123  Tool, Filter barrel insertion, RGQ         CNY                                  

9022118  Notebook_V2 XP          CNY                                  

9022023  Kit, transport Z-axis sensor upgrade, QX            CNY                                  

9238560  Upgrade App., MagAttract 96 Plant             CNY                                  

204974    Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit (400)             CNY                                  

204852    QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (80)         CNY                                  

204757    QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (4000)             CNY                            【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】      

133179    NeXtalStock Citric acid pH 2.8 (200)          CNY                                  

9015383  Unit, door lock, M96            CNY                                  

9001794  QIAcube HT/QIAxtractor, platform             CNY                                  

9012340  Side panel, robot arm            CNY                                  

1068337  Carrier RNA (Poly rA) (310µl)             CNY                                  

38041     GNA Cartridge (1ml)            CNY                                  

9015379  Holder, plate, with spring, M96            CNY                                  

9015368  Filters, dust, M96 (2)            CNY                                  

9015364  Nozzles, M96 (8)          CNY                                  

133157    NeXtalStock BIS-TRIS Propane pH9.5 (100)             CNY                                  

133150    NeXtalStock BIS-TRIS pH 5.5 (100)           CNY                                  

133073    NeXtalStock Pentaerythritol prop.(200)              CNY                                  

133065    NeXtalStock Malonic acid sod. salt (200)            CNY                                  

133055    NeXtalStock Lithium acetate  (200)           CNY                                  

805925    REPLI-g Service,  Single Tube (500 µg)           CNY                                  

133041    NeXtalStock di-Sodium tartrate  (200)              CNY                            【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】      

9001672  PyroMark Q96 ID Instrument complete       For performing pyrosequencing reaction on the Q96 ID     CNY                                  

951438    MagAttract DNA Blood M96 Kit (960)  MagAttract Suspension ａnd reagents for purification of genomic DNA from blood using the BioRobot M96 workstation    CNY                                  

9015334  Board, HC2            CNY                                  

133031    NeXtalStock CHES untit. (200)            CNY                                  

133024    NeXtalStock Cadmium sulfate  (200)         CNY                                  

9001610  QIAgility (incl.Laptop)          CNY                                  

9001570  Rotor-Gene Q 5plex Platform              CNY                                  

9015320  Belt, Z-motor, M48        CNY                                  

9015315  Belt, X-iming, M48        CNY                                  

9015310  Unit, door lock, M48            CNY                                  

QPH00177      Recombinant Human VEGF165     Peprotech       10ug/1mg/                          

QPH00178      Recombinant Human VEGF165     Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00179      Recombinant Murine VEGF   Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00180      Recombinant Human EPO     Prospec   5ug/50ug                     

QPH00181      Recombinant Human HGH     Prospec                              

QPH00182      Recombinant Human IFN-α2a       Prospec   20ug/100ug/                       

QPH00183      Recombinant Human IFN-α2b      Prospec   20ug/100ug/                       

QPH00184      PeproGrow- hESC 胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基              500ml                         

QPH00185      PeproGrow-hESC 胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基        100ml                         

QPH00186      人樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒 (HDC)             1pack                          

QPH00187      小鼠樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MDC)           1pack                          

QPH00188      人樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells, DC）培養(yǎng)用細(xì)胞因子套裝(無動物成分)             1pack                          

QPH00189      小鼠樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)用細(xì)胞因子套裝(無動物成分)        1pack                          

QPH00190      人造血干細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒 (HHSC3)          1pack                           【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】

QPH00191      小鼠造血干細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒 (MHSC3)             1pack                          

QPH00192      人造血干細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒(HHSC6)            1pack                          

QPH00193      小鼠造血干細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒(MHSC6)              1pack                          

QPH00194      人造血干細(xì)胞擴(kuò)增用細(xì)胞因子套裝(IL-6)(無動物成分)          1pack                          

QPH00195      人造血干細(xì)胞擴(kuò)增用細(xì)胞因子套裝(IL-3)(無動物成分)          1pack                          

QPH00196      正常小鼠IgG 1000ug                                     

QPH00197      正常兔IgG 500ug                                    

QPH00198      正常山羊IgG 1mg                                   

QPH00199      (BioGems)重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白 10g                                    

QPH00200      PeproGrow-1無血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物試劑盒 (培養(yǎng)HEK-293，HeLa和A549細(xì)胞)                                      

QPH00201      脂類混合溶液 (配11L無血清培養(yǎng)液)                                         

QPH00202      血清替代物溶液 (配10L無血清培養(yǎng)液)                                     

QPH00203      (BioGems)重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白 1g                                      

QPH00204      (BioGems)重組人胰島素 1g                                   

QPH00205      (BioGems)重組人胰島素 5g                                   

QPH00206      血清替代物溶液II                                          【腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞】

QYBS6221     沙門氏菌屬診斷血清60種  1ml×60瓶                                

α-突觸核蛋白, 96-140   Alpha-Synuclein, 96-140 0.5mg                  

α-突觸核蛋白, A53T突變體   Alpha-Synuclein, A53T mutant    0.5mg                  

α-突觸核蛋白, A53T突變體   Alpha-Synuclein, A53T mutant    1.0mg                  

α-突觸核蛋白, A30P突變體   Alpha-Synuclein, A30P mutant    0.5mg                  

α-突觸核蛋白, A30P突變體   Alpha-Synuclein, A30P mutant    1.0mg                   【臍動脈平滑肌細(xì)胞】

α-突觸核蛋白 A30P, A53T突變體  Alpha-Synuclein, A30P, A53T mutant  0.5mg                  

α-突觸核蛋白 A30P, A53T突變體  Alpha-Synuclein, A30P, A53T mutant  1.0mg                  

α-突觸核蛋白, E46K突變體   Alpha-Synuclein, E46K mutant    0.5mg                  

α-突觸核蛋白, E46K突變體   Alpha-Synuclein, E46K mutant    1.0mg                  

QYH20    生長激素（hGH）檢測試劑盒（血清）    Growth Hormone (hGH)       96孔/盒                      

QYH21    胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1（IGFBP-1）檢測試劑盒（血清）  Insulin-Like Growth Factor Binding Protein-1 (IGFBP-1)      96孔/盒                      

QYH22    促黃體生成素（hLH）檢測試劑盒（血清）     Luteinizing Hormone (hLH)   96孔/盒                      

QYH23    瘦素檢測試劑盒（血清）    Leptin     96孔/盒                       【臍靜脈平滑肌細(xì)胞】

QYH24    卵巢癌（CA125）檢測試劑盒（血清）    Ovarian Cancer (CA125)       96孔/盒                      

QYH25    孕烯醇酮檢測試劑盒（血清）    Pregnenolone  96孔/盒                      

QYH26    孕酮檢測試劑盒（血清）    Progesterone   96孔/盒                      

QYH27    孕酮（唾液）檢測試劑盒    Progesterone Saliva       96孔/盒                      

QYH28    催乳素檢測試劑盒（血清）       Prolactin  96孔/盒