【氣管平滑肌細胞】下面是細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網(wǎng)（300小時/預濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【氣管平滑肌細胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【氣管平滑肌細胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

細胞培養(yǎng)代理品牌

細胞培養(yǎng)代理品牌

【氣管平滑肌細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標準品和對照品的大型化學科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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130928    Nextal DWB CubicPhase I Suite           CNY                                  

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9001526  PyroMark Q96 MD       For performing pyrosequncing reaction on the Q96 MD     CNY                                  

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130921    NeXtal DWBlock Opti Salt Suite   Contains 96 x 0.5 ml of each OptiSalt solution     CNY                                  

4835024  careCT PCR ASSAY V2        CNY                                  

4556065  artus Mycobac. diff. LC PCR Kit (96) CE           CNY                                  

4555065  artus M.tuberculosis LC PCR Kit (96) CE           CNY                                  

130807    NeXtal CubicPhase Kit          CNY                                  

130709    NeXtal Tubes pHClear Suite         CNY                                  

130704    NeXtal Tubes PEGs Suite             CNY                                  

129117    Nuclease-Free Water (5 Liter)              CNY                                  

76506     RNAprotect Bacteria Reagent (2x100ml)      RNAprotect Bacteria Reagent (2 x 100 ml)   CNY                                  

74881     RNeasy 96 Universal Tissue Kit (4)             CNY                                  

74204     RNeasy MinElute Cleanup Kit (50)       50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers     CNY                                  

27291     QIAprep 96 Plus Miniprep Kit (4)         CNY                                  

PN522003      磺胺甲噁唑檢測試劑盒       Sulfamethoxazole ELISA Test Kit  96T 美國ABRaxis              

PN5111SB      鏈霉素檢測試劑盒       Streptomycin ELISA Test Kit 96T 美國ABRaxis              

PN515106      蘇丹紅檢測試劑盒       Sudan red ELISA Test Kit      96T 美國ABRaxis               【氣管平滑肌細胞】

PN52254BA    四環(huán)素檢測試劑盒       Tetracycline (TET) ELISA Test Kit       96T 美國ABRaxis              

PN900TES     睪酮檢測試劑盒    Testosterone ELISA Test Kit  96T 美國ABRaxis              

PN52252R      群勃龍檢測試劑盒       trenbolone ELISA Test Kit     96T 美國ABRaxis              

PN52256B      泰樂菌素檢測試劑盒    Tylosin ELISA Test Kit   96T 美國ABRaxis              

PN590001      乙氧基化物檢測試劑盒       Ethoxylate ELISA Test Kit     96T 美國ABRaxis              

PN520041      烷基酚檢測試劑盒       Alkylphenol ELISA Test Kit   96T 美國ABRaxis              

PN520031      直鏈烷基酚檢測試劑盒       Linear alkyl phenol ELISA Test Kit       96T 美國ABRaxis              

PN54003B      2,4-D檢測試劑盒  2,4-D ELISA Test Kit     96T 美國ABRaxis              

PN500021      乙草胺檢測試劑盒       Acetochlor ELISA Test Kit    96T 美國ABRaxis              

PN500076      甲草胺檢測試劑盒       Alachlor ELISA Test Kit 96T 美國ABRaxis              

PN520005      阿特拉津檢測試劑盒    Atrazine ELISA Test Kit 96T 美國ABRaxis              

PN500701      嘧菌酯檢測試劑盒       Azoxystrobin ELISA Test Kit 96T 美國ABRaxis              

PN520006      三嗪代謝物檢測試劑盒       Triazine Metabolite (DACT) ELISA Test Kit 96T 美國ABRaxis              

PN500800      吡蟲啉檢測試劑盒       Imidacloprid ELISA Test Kit  96T 美國ABRaxis              

PN54002B      多菌靈/苯菌靈檢測試劑盒   Carbendazim/Benomyl ELISA Test Kit  96T 美國ABRaxis              

PN540021      環(huán)戊二烯類(硫丹)檢測試劑盒     Cyclodienes ELISA Test Kit   96T 美國ABRaxis               【氣管平滑肌細胞】

PN540041      DDE/DDT檢測試劑盒  DDT/DDE ELISA Test Kit     96T 美國ABRaxis              

PN520001      敵草隆檢測試劑盒       Diuron ELISA Test Kit   96T 美國ABRaxis              

PN500511      氟啶草酮檢測試劑盒    Fluridone ELISA Test Kit       100T       美國ABRaxis              

PN500086      草甘膦檢測試劑盒       Glyphosate ELISA Test Kit    96T 美國ABRaxis              

PN500065      異丙甲草胺檢測試劑盒       Metolachlor ELISA Test Kit   96T 美國ABRaxis              

PN550055      有機磷酸酯檢測試劑盒       Organophosphorus ester/Carbamate (OP/C) ELISA Test Kit       96T 美國ABRaxis              

PN500501      五氟磺草胺檢測試劑盒       Penoxsulam ELISA Test Kit   96T 美國ABRaxis              

PN500705      吡唑醚菌酯檢測試劑盒       Pyraclostrobine ELISA Test Kit     96T 美國ABRaxis              

PN500201      擬除蟲菊酯檢測試劑盒       Pyrethroids ELISA Test Kit    96T 美國ABRaxis              

PN500601      氟樂靈檢測試劑盒       Trifluralin ELISA Test Kit      96T 美國ABRaxis              

PN541000      大腸桿菌 O26檢測試劑盒  E.coli O26 ELISA Test Kit     50T 美國ABRaxis              

PN541010      大腸桿菌 O45檢測試劑盒  E.coli O45 ELISA Test Kit     50T 美國ABRaxis