【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015354  Springs, gas (2)            CNY                                  

133054    NeXtalStock Imidazole HCl (200)         CNY                                  

9001671  PyroMark Q24 Instrument    For methylation ａnd mutation analysis using Pyrosequencing technology in 24 well  CNY                                  

950901    Capture Plate, standard yield (5)           CNY                                  

37430     PhosphoSerine Antibody Q5  100 ug mixture of anti-phosphoserine antibodies(isotypes mouse IgG1 ａnd IgM, for 200 ml working solution)   CNY                                  

133030    NeXtalStock Cesium sulfate (200)        CNY                                  

9001627  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) System  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) System Priority includes the Rotor-Gene system ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.     CNY                                  

9001620  Rotor-Gene Q 2plex System         CNY                                  

9001603  Rotor-Disc 100 Starter Kit (230V)        CNY                                  

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9015309  Block, heater, M48        CNY                                  

133140    NeXtalStock 1,2 Propanediol (200)             CNY                            【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】   

133020    NeXtalStock BIS-TRIS Propane (200)         CNY                                  

1043368  QIAamp DNA Blood Mini Accessory Set A          CNY                                  

133161    NeXtalStock CAPS pH 10.6 (200)        CNY                                  

133070    NeXtalStock BICINE (200)          CNY                                  

922911    LiquiChip Calibration Bead Kit       Classification Calibration Beads (CAL1, 5ml); Reporter Calibration Beads (CAL2, 5ml)       CNY                                  

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For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using probe detection with multiple assays." CNY                                  

204352    QuantiFast Probe PCR+ROX Vial Kit (80)           CNY                                  

9015361  Slide table              CNY                                  

133050    NeXtalStock HEPES sod. salt pH 7.5 (200)         CNY                                  

9018391  Key, Data Review, green, QIAxcel        CNY                                  

9018387  Lamp, UV, EZ1a            CNY                                  

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37591     Qproteome Murine Albumin Depletion Kit            CNY                                  

9015336  Regulator, DC24            CNY                                  

133034    NeXtalStock Ammonium citrate (200)         CNY                            【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】   

9001628  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) Priority  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) Priority includes the Rotor-Gene Q system, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with on site introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years with shipment to Repair Center Service has response turnaround time (repair) 7-10 days. One preventive maintenance visit is included for each year of the warranty; 2 preventive maintenance visits in total. Replacement system (Loaner) provision included (provision time 2-3 days) with transportation cost coverage. The service package includes all parts, labor ａnd travel costs with installation performance ａnd service visits documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents. CNY                                  

239035    GelPilot 100 bp Ladder (100) Ready-to-use DNA marker, 600µl (100lanes), 6 fragments: 100- 600 bp    CNY                                  

9015304  Sensor, reagent tub stopper, M48         CNY                                  

133144    NeXtalStock 8 M Ammonium acetate (200)         CNY                                  

QYD585  禽流感ELISA試劑盒（AI-Ab)    96孔/盒                             

QYD586  禽腦脊髓炎ELISA試劑盒（AE-Ab)   96孔/盒                             

QYD587  傳染性喉氣管炎ELISA試劑盒（ILT-Ab)  96孔/盒                             

QYD588  鴨腸炎沙門氏菌ELISA試劑盒（SE-Ab)   96孔/盒                             

QYD589  鴨鼠傷寒沙門氏菌ELISA試劑盒 （ST-Ab）   96孔/盒                             

QYD590  雞傳染性貧血ELISA試劑盒（CAV-Ab)     96孔/盒                             

QYD591  偽狂犬 -抗體檢測(cè)ELISA    96孔/盒                             

QYD592  豬瘟 - 抗體檢測(cè)ELISA      96孔/盒                              【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】

QYD593  豬瘟 - 抗原檢測(cè) ELISA     96孔/盒                             

QYD594  口蹄疫-NS(3ABC) - 抗體檢測(cè)ELISA 96孔/盒                             

QYD595  口蹄疫-NS(3ABC)- 抗體檢測(cè)ELISA  96孔/盒                             

QYD596  口蹄疫 - 抗體檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD597  藍(lán)耳病 - 抗體檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD598  圓環(huán)病毒 IgG - 抗體檢測(cè)ELISA       96孔/盒                             

QYD599  豬水泡病毒 - 抗體檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD600  豬細(xì)小病毒 - 抗體檢測(cè)ELISA: Ceditest PPV   96孔/盒                             

QYD601  豬傳染性胸膜肺炎 - 抗體檢測(cè)ELISA：Ceditest APP     96孔/盒                             

QYD602  豬瘟 - 抗體檢測(cè)ELISA      96孔/盒                             

QYD603  豬傳染性胸膜肺炎 - 抗體檢測(cè)ELISA      96孔/盒                             

QYD604  豬丹毒 - 抗體檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD605  豬丹毒 - 抗原檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD606  豬傳染性胃腸炎 - 抗體檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD607  豬沙門氏菌 - 抗體檢測(cè)ELISA   96孔/盒                             

QYD608  豬流感- 抗體檢測(cè)ELISA    96孔/盒                              【卵巢癌組織源性原代細(xì)胞】

QYD609  豬流感- 抗原檢測(cè)ELISA    96孔/盒                             

QYD610  豬副嗜血桿菌- 抗體檢測(cè)ELISA 96孔/盒                             

QYD611  豬輪狀病毒- 抗體檢測(cè)ELISA    96孔/盒                             

QYD612  豬輪狀病毒- 抗原檢測(cè)ELISA    96孔/盒                             

QYD613  反芻動(dòng)物弓形蟲抗體檢測(cè)ELISA       96孔/盒                             

QYD614  非洲豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒    96孔/盒                             

QYD615  鯉魚卵黃蛋白原試劑盒       96孔/盒                             

QYD125  豬嗜血桿菌(HPS)檢測(cè)試劑盒     96孔/盒 用于測(cè)定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中嗜血桿菌(HPS)表達(dá)                         

QYD126  雞禽流感H5N1抗體檢測(cè)試劑盒 96孔/盒                             

QYD201  雞禽流感H9抗體檢測(cè)試劑盒     96孔/盒                             

QYD201  雞傳染性喉氣管炎抗體檢測(cè)試劑盒    96孔/盒