【腎癌組織源性原代細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開(kāi)的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開(kāi)后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腎癌組織源性原代細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說(shuō)明，具體詳細(xì)請(qǐng)見(jiàn)細(xì)胞附帶說(shuō)明書(shū)

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長(zhǎng)方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腎癌組織源性原代細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

 如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【腎癌組織源性原代細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷(xiāo)售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷(xiāo)售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

336835    Custom Cignal Finder Reporter Array          CNY                                  

336111    Custom ELISArray        CNY                                  

940057    BioSprint 96 DNA Blood Kit (384)        CNY                                  

334471    EpiTect ChIP OneDay Kit (12)             CNY                                  

331260    miScript PreAMP Custom Primer Mix         CNY                                  

331001    RT² miRNA qPCR Assay (200)            CNY                                  

9010969  Plate stacker, detachable Unit for stacking up to ten 96-well plates; for use with the robotic handling system  CNY                            【腎癌組織源性原代細(xì)胞】      

9010928  Motor, X, SamTrack, P3xxx        CNY                                  

979302    PyroMark Q24 Cartridge (3) CE   For delivery of nucleotides ａnd reagents for use in PyroMark Q24. CE-Marked CNY                                  

981303    Rotor-Disc 72 (240)             CNY                                  

981005    PCR Tubes, 0.2 ml  (1000)          CNY                                  

9012976  Gripper, left, landoplasted, MTP 120            CNY                                  

931955    QIAsymphony Certal Vaccine NA Kit (96)           CNY                                  

929707    QX Cartridge Stand Cover (1)             CNY                                  

133252    NeXtalStock Sodium phosphate pH 7 (200)         CNY                                  

929606    QX FA Separation Buffer (40 ml)         CNY                                  

9010509  Motor, turntable 1/2 MTP, P3/7            CNY                                  

69525     mericon DNA Bacteria Kit (100)           CNY                                  

69106     DNeasy Plant Mini Kit (250)  250 DNeasy Mini Spin Columns, 250 QIAshredder Mini Spin Columns, RNase A, Buffers, Collection Tubes (2 ml)  CNY                                  

211015    QuantiTect Virus Kit (1000)          CNY                                  

206674    Type-it CNV SYBR Green PCR +qC Kit (400)            CNY                                  

9012763  Liquid Handling Kit Plato 1300             CNY                                  

59568     EpiTect Control DNA (1000)        CNY                            【腎癌組織源性原代細(xì)胞】      

979014    MOTT 16S Primers For PCR              CNY                                  

979011    PyroMark Q96 Vacuum Prep Trough (5)     Re-usable plastic troughs for use in all PyroMark Q96 Vacuum Workstations.       CNY                                  

59932     EpiTect MethyLight Assay Hs-ONECUT2(100)    "10-fold primer TaqMan probe mix, for real-time MethyLight PCR

For TaqMan probe-based real-time quantification of methylated or unmethylated CpG sites"    CNY                                  

59695     EpiTect PCR Control DNA Set (100)           CNY                                  

206343    Type-it Mutation Detect PCR Kit (200) "The Type-it Mutation Detect PCR Kit is especially developed for to fast ａnd reliable detection of mutations such as deletions, insertions,and translocations. It is also highly suited for multiplex PCR-based preamplification of SNPs as preparation for genotyping systems like the

SNaPshot Multiplex Kit from ABI

Features

 Successful & reproducible analysis of multiple mutations

 Optimization-free multiplex PCR assay development

 Specific ａnd sensitive coamplification of all fragments

 Optimized protocol for fast ａnd reliable results"      CNY                                  

206341    Type-it Mutation Detect PCR Kit (70)   "The Type-it Mutation Detect PCR Kit is especially developed for to fast ａnd reliable detection of mutations such as deletions, insertions,and translocations. It is also highly suited for multiplex PCR-based preamplification of SNPs as preparation for genotyping systems like the

SNaPshot Multiplex Kit from ABI

Features

 Successful & reproducible analysis of multiple mutations

 Optimization-free multiplex PCR assay development

 Specific ａnd sensitive coamplification of all fragments

 Optimized protocol for fast ａnd reliable results"      CNY                                  

9012719  Set, Pins, (6 small, 4 large)           CNY                                  

929561    QX Size Marker 50 - 800 bp v2.0 (50 µl)            CNY                                  

972804    PyroMark Gold Q96 Reagents (5 x 96) "For performing pyrosequencing reaction on the ID (5x 96) ａnd Q96 MD (15x96)

ID needs more reagents"       CNY                                  

301705    HiPerFect Transfection Reagent (1 ml)        CNY                                  

QYC311  鴿腺病毒試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC401  犬細(xì)小抗體金標(biāo)檢測(cè)卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC402  犬細(xì)小抗原金標(biāo)檢測(cè)卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC403  犬瘟熱抗原金標(biāo)檢測(cè)卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC404  犬衣原體抗體金標(biāo)檢測(cè)卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC405  犬支原體抗體金標(biāo)檢測(cè)卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC406  犬冠狀病毒檢測(cè)試紙卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC407  犬腺病毒II 型檢測(cè)試紙卡  20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC408  犬副流感病毒檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC409  犬心絲蟲(chóng)抗原檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC410  犬狂犬病毒抗原檢測(cè)試紙卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC411  犬腺病毒1型檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC412  犬流感檢測(cè)試紙卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC413  貓瘟病毒檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                         【腎癌組織源性原代細(xì)胞】

QYC414  貓傳染性腹膜炎病毒檢測(cè)試紙卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC415  貓白血病病毒檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC416  貓免疫缺陷病毒檢測(cè)試紙卡       20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC417  利什曼蟲(chóng)檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC418  鸚鵡熱衣原體檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC419  布氏桿菌抗體檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC420  布氏桿菌抗原檢測(cè)試紙卡    20T/盒    抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC501  蔬菜農(nóng)藥速測(cè)卡    20T/盒    蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)                           

QYC502  茶葉農(nóng)藥速測(cè)卡    20T/盒    茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)                           

QYC503  "糧食農(nóng)藥速測(cè)卡

"      20T/盒    糧食農(nóng)藥殘留檢測(cè)                           

QYC504  蔬菜農(nóng)藥檢測(cè)卡    20T/盒    蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)                           

QYC505  高靈敏度農(nóng)藥速測(cè)卡    20T/盒    蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)                           

QY101    鹽酸克倫特羅檢測(cè)試劑盒    96孔/盒 各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QY102    萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒       96孔/盒 各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QY103    沙丁胺醇檢測(cè)試劑盒    96孔/盒 各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QY104    β-興奮劑檢測(cè)試劑盒  96孔/盒 各種動(dòng)物組織/水產(chǎn)/蜂蜜                          【腎癌組織源性原代細(xì)胞】

QY105    呋喃唑酮代謝物檢測(cè)試劑盒       96孔/盒 各種動(dòng)物組織/水產(chǎn)/蜂蜜