【肺癌組織源性原代細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【肺癌組織源性原代細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【肺癌組織源性原代細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【肺癌組織源性原代細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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159205    QIAcard FTA Four Spots (100)           CNY                                  

159203    QIAcard FTA Two Spots (100)            CNY                                  

159112    QIAsafe DNA 96-Well Plates (10)        CNY                                  

158920    Puregene Proteinase K (5 ml)        CNY                                  

158914    DNA Hydration Solution (100 ml)         CNY                                  

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34362     TAGZyme DAPase Enzyme (2,5U)       For processing of approximately 50 mg tagged protein: 2.5 units DAPase Enzyme, 20 mM Cysteamine-HCl (1 ml)     CNY                                  

30991     Glutathione HiCap Cartridges (5 x 5 ml)              CNY                                  

30450     Ni-NTA Superflow (500 ml)  500 ml nickel-charged resin (max. pressure: 140 psi)  CNY                                  

9011533  Zdrive unit, BR8000              CNY                                  

9013182  Tubing, pressure relief valve outlet, DI        CNY                                  

9243539  HC2, PM Service   The Preventive Maintenance (PM) service ensures the correct operation of the equipment. During the PM, all the instrument modules are inspected by a qualified QIAGEN service technician. The Preventive Maintenance is performed under the manufacturer guidelines ａnd documented according to GLP / GMP   CNY                                  

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389003    Investigator IDproof Server Key          CNY                                  

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381545    Investigator ESSplex SE Plus Kit (100)        CNY                                  

338912    Return Sample Fee        CNY                                  

381317    Investigator Nonaplex ESS Kit (400)           CNY                                  

QY-G269 綠猴腎細(xì)胞    Vero       上皮細(xì)胞       貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G270 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞       COS-7 SV40  成纖維細(xì)胞    貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G271 狗腎細(xì)胞       MDCK  上皮細(xì)胞       貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G272 豬動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞    PIEC      上皮細(xì)胞       貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G273 豬干細(xì)胞       MSCs     上皮細(xì)胞       貼壁       DMEM（低糖）    胎牛血清      

QY-G274 人腎上皮細(xì)胞       HK-2       上皮細(xì)胞       貼壁       DMEM/F12    胎牛血清      

QYC01    鹽酸克倫特羅(瘦肉精）快速檢測卡  20T/盒    各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC02    萊克多巴胺快速檢測卡       20T/盒    各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC03    沙丁胺醇快速檢測卡    20T/盒    各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC04    β-興奮劑快速檢測卡  20T/盒    各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC05    三聚氰胺快速檢測卡    20T/盒    水產(chǎn)、牛奶、奶粉                           

QYC06    孔雀石綠快速檢測卡    20T/盒    水產(chǎn)、飼料等                            【肺癌組織源性原代細(xì)胞】

QYC07    呋喃唑酮代謝物快速檢測卡       20T/盒    水產(chǎn)、飼料等                           

QYC08    呋喃它酮代謝物快速檢測卡       20T/盒    水產(chǎn)、飼料等                           

QYC09    呋喃妥因代謝物快速檢測卡       20T/盒    水產(chǎn)、飼料等                           

QYC10    呋喃西林代謝物快速檢測卡       20T/盒    水產(chǎn)、飼料等                           

QYC11    氯霉素快速檢測卡       20T/盒    水產(chǎn)、蜂蜜、牛奶、奶粉                        

QYC12    磺胺類多殘留快速檢測卡    20T/盒    蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC13    阿維菌素、伊維菌素快速檢測卡       20T/盒    蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC14    氟喹諾酮類快速檢測卡       20T/盒    蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC15    己烯雌酚快速檢測卡    20T/盒    水產(chǎn)、蜂蜜、飼料等                        

QYC16    氟喹諾酮總量檢測卡    20T/盒    水產(chǎn)、蜂蜜、飼料等                        

QYC17    磺胺類多殘留檢測卡    20T/盒    水產(chǎn)、蜂蜜、飼料等                        

QYC18    黃曲霉毒素B1快速檢測卡        20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC19    黃曲霉毒素M1快速檢測卡       20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC20    青霉素快速檢測試紙卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC21    β內(nèi)酰胺類快速檢測試紙卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC22    紅霉素快速檢測試紙卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                            【肺癌組織源性原代細(xì)胞】

QYC23    新霉素快速檢測試紙卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC24    頭孢噻呋快速檢測試紙卡   20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC201  豬瘟抗體檢測卡    20T/盒    抗血清檢測診斷