【Ⅱ型肺泡上皮細胞】下面是細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當特別小心操作，并選擇適當?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【Ⅱ型肺泡上皮細胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【Ⅱ型肺泡上皮細胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細胞培養(yǎng)代理品牌

細胞培養(yǎng)代理品牌

【Ⅱ型肺泡上皮細胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標準品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9012718  Pipetting Position (raised platform)              CNY                                  

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970470    BRAF Pyro Kit (24)              CNY                                  

970061    MGMT Pyro Kit (48)            CNY                                  

133209    NeXtalStock MES pH 5.0 (100)           CNY                                  

292065    mericon Sheep Kit (96)         CNY                                  

292045    mericon Turkey (96)            CNY                                  

929501    QX Pro Calibration Marker (0.6 ml)            CNY                                  

9012658  Cable, X-BCR board to buffer track reade           CNY                                  

9012644  BGR Nadelrohr P7 Standardnadeln              CNY                            【Ⅱ型肺泡上皮細胞】      

9012595  Disposable Tips, 1100µl (960)      Conducting disposable tips    CNY                                  

206143    QIAGEN Multiplex PCR Kit (100) "For 100 x 50ul multiplex PCR reactions:

2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (HotStarTaq® DNA Polymerase,Multiplex PCR Buffer, dNTP Mix) (providing a final concentration of 3 mM MgCl2, 3 x 0.85 ml),

5x Q-Solution (1 x 2.0 ml),

distilled water (2 x 1.7 ml)"   CNY                                  

132107    EasyXtal 15-well DG-Tool (100)          CNY                                  

337849    qBiomarker SYBR ROX FAST Mastermix 25 ml         CNY                                  

762635    QIAsymphony PAXgene Blood RNA Kit (96)              CNY                                  

204001    Rotor-Gene Sybr Green PCR Demo Kit (80)              CNY                                  

203446    HotStarTaq Master Mix Kit (2500)       "1x25 ml HotStarTaq Master Mix (providing a final concentration of 1.5mM MgCl2, ａnd 200 uM each dNTP), containing 2500 units HotStarTaq DNA Polymerase total, ａnd 2 x 20 ml RNase-free Water

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Please note 2005 Product guide is incorrect - this product is NOT 30vials of 0.85ml"      CNY                                  

203207    HotStarTaq DNA Polymerase (5000)    "1 x 5000 units of HotStarTaq DNA Polymerase

10X PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2)

5X Q-Solution

25 mM MgCl2"      CNY                                  

203205    HotStarTaq DNA Polymerase (1000)    "4 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer,* 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2

FOR MORE INFO ABOUT THIS PRODUCT PLEASE SEE HOTSTARTAQ DNA POLYMERASE 250 UNITS (203203)"    CNY                                  

202602    HotStar HiFidelity Polymerase Kit (100)       100 units HotStar HiFidelity DNA Polymerase, 5x PCR Buffer containing dNTPs, 5x Q-Solution, 25 mM MgSO4, RNase free water CNY                                  

159932    Generation Capture Plate Kit (12)         CNY                                  

159330    Harris UNI-CORE 1.25 mm Punch Kit (4)          CNY                                  

159155    QIAsafe DNA Blood Rehydration Set (100)         CNY                                  

158845    Gentra Puregene Buccal Cell Kit (100)         CNY                                  

158667    Gentra Puregene Tissue Kit (4 g)         CNY                                  

34610     RGS·His Antibody (100 µg)       100 ug mouse anti-RGS(H)4 (lyophilized, with BSA, for 1000 ml working solution)       CNY                            【Ⅱ型肺泡上皮細胞】      

EK0540   rVEGF-ELISA       大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子ELISA試劑盒       Rat VEGF ELISA Kit     96 tests                

EK0639   rMMP2-ELISA      大鼠MMP-2ELISA試劑盒   Rat MMP-2 ELISA Kit   96 tests                

QY-G016 人肺癌GFP綠色熒光細胞   NCI-H460/GFP      上皮細胞       貼壁       RPMI1640      胎牛血清      

QY-G017 人肺癌GFP綠色熒光細胞   A549/GFP      上皮細胞       貼壁       RPMI1640      胎牛血清       【Ⅱ型肺泡上皮細胞】

QY-G018 人肺癌GFP綠色熒光細胞   H1299/GFP    上皮細胞       貼壁       RPMI1640      胎牛血清      

QY-G019 人惡性膠質(zhì)母細胞瘤GFP綠色熒光細胞   U87/GFP 上皮細胞       貼壁       RPMI1640      胎牛血清      

QY-G020 人乳腺癌熒光素酶Luciferin細胞       MCF-7/LUC   上皮細胞       貼壁       RPMI1640      胎牛血清      

QY-G021 人乳腺癌熒光素酶Luciferin細胞       MDA-MB-231/LUC       上皮細胞       貼壁       RPMI1640      胎牛血清      

QY-G022 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移RFP紅色熒光細胞   B16F10/RFP   成纖維細胞樣       貼壁       RPMI1640      胎牛血清      

QY-G023 人淋巴細胞瘤細胞       JK(Jurkat)     淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G024 人Burkitt`s淋巴瘤細胞 Raji       淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G025 人Burkitt`s淋巴瘤細胞       NAMALWA    淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G026 人急性淋巴母細胞白血病細胞    MOLT-4  淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G027 人白血病細胞       K562      淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G028 人白血病細胞       HL-60     原粒細胞       懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G029 人白血病細胞       U937     單核細胞       懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G030 人白血病細胞       EP-1      原粒細胞       懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G031 人T細胞白血病細胞   6T-CEM  淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G032 人T細胞白血病細胞   HuT 78         淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G033 人T淋巴細胞白血病細胞   A3 淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清       【Ⅱ型肺泡上皮細胞】

QY-G034 人急性T淋巴細胞白血病   CCRF-CEM    淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G035 人急性非B非T淋巴細胞白血病       Reh  淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G036 人單核細胞白血病細胞       THP-1     單核細胞       懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G037 人巨核細胞保白血病細胞   Dami     淋巴母細胞樣       懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G038 人成巨核細胞白血病細胞   MEG-01        淋巴母細胞樣       懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G039 人紅白細胞白血病細胞      HEL       淋巴母細胞樣       懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G040 人早幼粒細胞白血病    NB4 淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G041 人急性淋巴細胞白血病細胞       CEM/C1  淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G042 人外周血嗜堿性白血病細胞       KU812    淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G043 人白血病細胞       U266       淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清      

QY-G044 人多發(fā)骨髓瘤細胞       OCI-MY5       淋巴母細胞    懸浮       RPMI-1640    胎牛血清