【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019340  LED, blue (470), RG6           CNY                                  

9019236  Bearing, PyroQ24          CNY                                  

9020462  PMT, GSC            CNY                            【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】  

1026901  MagAttract Suspension G (13/15),KG  13 ml volume of suspension G      CNY                                  

9233576  Label, Biorobot3000              CNY                                  

9019229  Memory Card, PyroQ24        CNY                                  

9019215  Cog belt kit - Robot, PyroQ96MD        CNY                                  

9019214  PCB - Shutter, PyroQ96MD         CNY                                  

9019208  Cable - Y  robot, PyroQ96MD            CNY                                  

1066850  AIV-H7 RT-PCR REAGENT LE           CNY                                  

9232904  YZ-CPU Board              CNY                                  

1061082  CT PCR REAGENT I           CNY                                  

1061107  PG AIV-H9 RT-PCR Assay (48) Z        CNY                                  

1061112  HIV-1 RT-PCR REAGENT I         CNY                                  

1061114  AIV-H7 RT-PCR REAGENT         CNY                                  

9016652  Vacuum Trap Bottle 4l, UTP         CNY                                  

9016420  Tubing Sys., Bottle, BR8 RD UTP        CNY                                  

9016271  Maintenance Kit, BR MDx v2              CNY                                  

9016268  Upgrade Kit, DISU, BR8000         CNY                            【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】  

9016237  Bag for Waste Container        CNY                                  

9016122  Maintenance Kit, RoboVac, BR8000 I,SBS          CNY                                  

9019176  Window, PyroQ96MD          CNY                                  

9011840  Set, Tubing, PeristalticPump, In/Out, P3             CNY                                  

9019137  Reagent chamber lid, PyroQ96ID         CNY                                  

9019120  PCB  5 - Connection, PyroQ96ID              CNY                                  

9019111  PCB - Interconnection, PyroQ96ID             CNY                                  

9019084  PyroMark Q96 ID Software (5)    For use with PyroMark Q96 ID instrument.Software for setting up a run ａnd analyzing mutations ａnd sequence identification.  CNY                                  

9019063  PyroMark Q24 MDx Software      For methylation ａnd mutation analysis using Pyrosequencing technology in 24 well CE-marked.    CNY                                  

9019020  Coupling, Z axis, EZ1xl         CNY                                  

9019019  Coil, EZ1xl            CNY                                  

9019005  Door lock assembly, EZ1xl           CNY                                  

9022710  Enclosure, Silver, DML3000         CNY                                  

9016069  Maintenance Kit, RoboVac, BR8000 II         CNY                                  

QY-x1076       人肺腺癌細(xì)胞（胸膜滲出液）Calu-3                                   

QY-x1077       人肺癌細(xì)胞系（未分化）Calu-6                                   

QY-x1078       人胚肺二倍體細(xì)胞HLF-02                                    

QY-x1079       人肺癌細(xì)胞系Tul-1                                         【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】

QY-x1080       人胚肺成纖維細(xì)胞HFL-I                                       

QY-x1081       人胚肺細(xì)胞MRC-5                                        

2QY-x1082     人胚肺細(xì)胞WI-38                                         

QY-x1083       人SV－40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞 WI－38AV13                                       

QY-x1084       人肺癌亞歷山大細(xì)胞系PLC/PRF/5                                      

QY-x1085       人肺巨細(xì)胞癌(PG)的低轉(zhuǎn)移亞系PG-LH7                                    

QY-x1086       人肺巨細(xì)胞癌(PG）的高轉(zhuǎn)移亞系PG-BE1                                         

QY-x1087       人肺腺癌細(xì)胞系PG49                                    

QY-x1088       人肺腺癌細(xì)胞GLC-82                                    

QY-x1089       人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞HLAmP                                    

QY-x1090       人肺腺癌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細(xì)胞）GLC-82-TK                                    

QY-x1091       人胚肺成纖維細(xì)胞突變癌細(xì)胞Z-HL16C                                      

QY-x1092       人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞HPAEC                                     

QY-x1093       人肺泡上皮細(xì)胞HPAEpiC                                      

QY-x1094       人胚肺成纖維細(xì)胞CCC-HPF-1                                     

QY-x1095       人低分化肺腺癌細(xì)胞SK-LU-1                                       【胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞總DNA】

QY-x1096       人肺鱗癌細(xì)胞LTEP-s                                     

QY-x1097       人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞LTEP-sm                                         

QY-x1098       人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞LTEP-P                                    

QY-x1099       人肺癌細(xì)胞973                                       

QY-x1100       人胚肺成纖維細(xì)胞　HELF                                    

QY-x1101       人低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-C                                        

QY-x1102       人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D                                        

QY-x1103       人肺腺癌細(xì)胞A2                                    

QY-x1104       人支氣管上皮細(xì)胞HBE                                         

QY-x1105       人支氣管上皮細(xì)胞16HBE                                      

QY-x1106       人腎癌細(xì)胞Ketr-3