【腦成纖維細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腦成纖維細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腦成纖維細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【腦成纖維細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019374  Housing, bearing w/coupling, motor, RG6           CNY                                  

9019362  Connector USB, serial internalcabl, RG6             CNY                                  

9019353  Flap, cooling, RG6        CNY                                  

1027411  FlexiPlate siRNA - 0.1 nmol          CNY                                  

1027310  Negative Control siRNA (20 nmol)              CNY                                  

1027298  AllStars Cell Death Contr.siRNA (5nmol)             CNY                                  

9019341  LED, yellow (585), RG6              CNY                                  

9234712  Board, level sensor, BR8000 v1.02              CNY                                  

9020469  Peltier module, GSC             CNY                                  

9234541  Pumphead click＇n＇go; HSPS; BR3/9604        CNY                                  

9234462  Coupling, CPC, inline, male, 8mm        CNY                                  

9234406  Valve solenoid, 5-fold, 0        CNY                            【腦成纖維細(xì)胞總DNA】  

9234321  Power supply, 24V, BR8000         CNY                                  

9019230  Keypad, PyroQ24          CNY                                  

9237170  Sample Needle Height Alignment Kit            CNY                                  

9233173  Board, YZ-adapter, BR8000          CNY                                  

9237157  LED Board XYP            CNY                                  

9237124  Upgrade App., MinElute 96    Take advantage of our instrumentation ａnd molecular biology expertise to install MinElute 96  on your BioRobot System.  The onsite protocol development visit includes all travel ａnd labor for the visit to install the standard QIAGEN MinElute 96 protocol, plus a MinElute 96 BioRobot Kit (4-plate) Cat # 28051    CNY                                  

9237099  Upgrade BR configuration, on site        CNY                                  

9236424  Motor, rotary, TWI        CNY                                  

9232970  YZ 96 Connector Board 2 (Arm), E10103           CNY                                  

9236409  Plate Stacker TW I, microplate            CNY                                  

9236357  Sample Holder Large, 1.5ml          CNY                                  

9232911  Board, YZ driver            CNY                                  

9236336  Analog Board         CNY                                  

9236158  Pot. , syr. or vert. , kit, RapidPlate              CNY                                  

9236149  Locator Plate, 96 well,pos 4-5,BR RP          CNY                                  

9236114  O-Ring, Coupling, RoboVac, BR8 RD v4.2          CNY                            【腦成纖維細(xì)胞總DNA】  

9236107  Flange Tool            CNY                                  

9230680  Probe, 0.4 mm, BR8000 v1.01             CNY                                  

9230478  Rack f. Diamend Gel Cards (holds 6cards)          CNY                                  

9230473  Set, Cables, PCB (X-main) to shaker           CNY                                  

9235646  Connector, Board, HS shaker, BR8000 v1.0         CNY                                  

QY-x797  Bcap-37乳腺癌                                       

QY-x798  HeLa宮頸癌                                     

QY-x799  ZR-75-30乳腺癌                                     

QY-x800  HeLa229宮頸癌                                      

QY-x801  MCF-7乳腺腺癌                                     

QY-x802  KB-C1.5宮頸癌                                       

QY-x803  SK-BR-3乳腺腺癌                                   

QY-x804  HCC子宮高分化鱗癌                                     

QY-x805  MDA-MB-435S乳腺管癌                                       

QY-x806  JAR胎盤絨毛癌                                      

QY-x807  T47D乳腺管癌                                        【腦成纖維細(xì)胞總DNA】

QY-x808  RD惡性胚胎橫紋肌瘤                                    

QY-x809  HBL-100乳腺細(xì)胞                                   

QY-x810  BT-325神經(jīng)膠質(zhì)瘤                                        

QY-x811  SMC-1惡性胸膜間皮瘤                                         

QY-x812  SK-N-SH神經(jīng)母細(xì)胞瘤                                         

QY-x813  A2肺癌                                    

QY-x814  SHG-44膠質(zhì)瘤                                       

QY-x815  95-D高轉(zhuǎn)移肺癌                                     

QY-x816  A375惡性黑色素瘤                                        

QY-x817  Calu-3肺腺癌 （胸膜滲出液）                                    

QY-x818  Bowes Melanoma黑色素瘤                                    

QY-x819  LTEP-a-2肺腺癌                                     

QY-x820  MM96L黑色素瘤                                    

QY-x821  SH-77小細(xì)胞肺癌                                   

QY-x822  J-111單核細(xì)胞白血病                                    

QY-x823  NCI-H446小細(xì)胞肺癌                                     【腦成纖維細(xì)胞總DNA】

QY-x824  Dami巨核細(xì)胞                                        

QY-x825  SPC-A-1肺腺癌                                      

QY-x826  CHMas肥大細(xì)胞白血病                                        

QY-x827  SGC-7901胃腺癌