【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9019124  Fan - peltier, PyroQ96ID              CNY                            【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】  

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9019009  Plunger unit, EZ1xl        CNY                                  

9019007  Magnet unit, w reflector, EZ1xl            CNY                                  

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9018943  Adapter, MagNa Pure LC 32-Well Plate        CNY                                  

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None of our protocols use microtubes so this is an accessory that most likely KF customers would use. We do not ship this tray with the instrument"       CNY                                  

9016002  Magnet head for deep well plate, BS96         CNY                                  

9015863  EZ1 DNA DRD BLD Card     Pre-programmed card for BioRobot EZ1 protocols for dried blood samples      CNY                                  

9015825  Upg. Kit, V-Motor position, BR8 (ISI22)             CNY                                  

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9015531  Controller, temperature          CNY                            【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】  

9019164  Tool, O-Ring change, Qsym         CNY                                  

9019162  Cable kit - X/Y, PyroQ96MD        CNY                                  

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9019149  Fan - IPC 40x40, PyroQ96MD            CNY                                  

QY-x310  人毛囊外根鞘細(xì)胞                                         

QY-x311  人毛囊內(nèi)根鞘細(xì)胞                                         

QY-x312  人乳腺表皮細(xì)胞                                      

QY-x313  人乳腺成纖維細(xì)胞                                         

QY-x314  人星形膠質(zhì)細(xì)胞                                      

QY-x315  人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞                                      

QY-x316  人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞                                         

QY-x317  人雪旺細(xì)胞                                      

QY-x318  人神經(jīng)束膜細(xì)胞                                      

QY-x319  人神經(jīng)束膜細(xì)胞                                       【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】

QY-x320  人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞                                         

QY-x321  人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞                                         

QY-x322  人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞                                      

QY-x323  人心肌細(xì)胞                                      

QY-x324  人心肌細(xì)胞-成人                                    

QY-x325  人心臟成纖維細(xì)胞                                         

QY-x326  人成纖維細(xì)胞-成人心室                                        

QY-x327  人成纖維細(xì)胞-成人心房                                        

QY-x328  人前列腺上皮細(xì)胞                                         

QY-x329  人間充質(zhì)干細(xì)胞－骨髓                                         

QY-x330  人間充質(zhì)干細(xì)胞－脂肪                                         

QY-x331  人間充質(zhì)干細(xì)胞－肝                                      

QY-x332  人間充質(zhì)干細(xì)胞－臍帶                                         

QY-x333  人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞                                         

QY-x334  人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞                                         

QY-x335  人臍靜脈平滑肌細(xì)胞                                       【膠質(zhì)腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】

QY-x336  人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞                                      

QY-x337  ECV304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株                                       

QY-x338  PC-12分化大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤                                      

QY-x339  PA317鼠胚胎成纖維細(xì)胞                                      

QY-x340  SP2/0骨髓瘤細(xì)胞