【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說(shuō)明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說(shuō)明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長(zhǎng)方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

 如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019565  Clamp, cable 2 wires 2 tabs, Cxx         CNY                                  

9019543  Bow spring, table rail, Cxx           CNY                                  

9019510  CHAMBER MAIN VAC STATION 1820              CNY                                  

9019505  PLATE SEPARATOR 48 WELL HIGH         CNY                                  

204256    QuantiFast Probe PCR Kit (2000)         CNY                                  

204174    Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit (400) The Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly specific quantification in real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I.  CNY                                  

204154    QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (400)         CNY                                  

9019424  Wiring, lower heater, RG3            CNY                                  

9019417  Fan, lid, RG3         CNY                                  

9019393  Solenoid, cooling with flap, RG3          CNY                                  

9019386  Photo Multiplier Tube with cable, RG3        CNY                                  

9019368  Damper, lid, RG6          CNY                            【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】     

9019347  Motor, 12VDC Heater fan, RG6           CNY                                  

9234697  Manual Hardware Plato 7             CNY                                  

9020477  Gasket, front plate, GSC              CNY                                  

9234463  Coupling, CPC, inline, female, 8mm            CNY                                  

1027285  AllStars Neg. siRNA AF 546 (5 nmol)          CNY                                  

1022564  Mm/Hs_MAPK1 control siRNA (5 nmol)            CNY                                  

9019205  Opto - Stacker, PyroQ96MD        CNY                                  

9019204  Opto - Robot Z motor , PyroQ96MD           CNY                                  

9019200  Hinge kit - Top cover, PyroQ96MD             CNY                                  

1022073  Luciferase GL3 siRNA (5 nm)             CNY                                  

1022064  GFP-22 siRNA (5 nm)          CNY                                  

1018996  PCR Buffer, 10 x (22ml/30),KG           CNY                                  

1064605  MagAttract M48 DNA Manual Kit  (200)           CNY                                  

1066851  PG FMDV RT-PCR Assay (48) LE Z           CNY                                  

1061054  HBV PCR REAGENT I         CNY                                  

1061069  UU PCR REAGENT II          CNY                            【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】     

1061079  NG PCR REAGENT II         CNY                                  

9019886  Lid, label 4CH, RG3              CNY                                  

9019875  Cover, main, silver, RGQ              CNY                                  

9019836  IPC Hard Drive PCA6751,  PyroQ96ID             CNY                                  

9019769  Valve, shutoff, V2, QX          CNY                                  

QY-HC084      表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞 293FT  293FT                                

QY-HC085      人肺鱗癌細(xì)胞系 NCI-H226 NCI-H226                                 

QY-HC086      人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系 K562     K562                                  

QY-HC087      人舌癌細(xì)胞 Tca-8113   Tca-8113                            

QY-HC089      人胚腎上皮包裝細(xì)胞 GP2-293   GP2-293                            

QY-HC090      高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 LM3      LM3                                  

QY-HC091      高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 MHCC97-H   MHCC97-H                               

QY-HC092      低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 MHCC97-L   MHCC97-L                                

QY-HC093      人腎小管上皮細(xì)胞系HK-2  HK-2                                  

QY-HC094      人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A   HEC-1-A                            

QY-HC095      人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B   HEC-1-B                             【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】

QY-HC096      人Ishikawa子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 ISK       ISK                             

QY-HC097      人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 AN3CA     AN3CA                              

QY-HC098      人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 IMR-32     IMR-32                              

QY-HC099      人皮膚成纖維細(xì)胞 HSF      HSF                            

QY-HC0100    人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞 RAJI RAJI                                  

QY-HC0101    人B淋巴細(xì)胞急性白血病細(xì)胞 BALL-1     BALL-1                              

QY-HC0102    人宮頸癌細(xì)胞 Hela-s3  Hela-s3                               

QY-HC0103    人卵巢癌細(xì)胞 HO-8910      HO-8910                            

QY-HC0104    人腎小球系膜細(xì)胞 HMC     HMC                                  

QY-HC0105    人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446     NCI-H446                                 

QY-HC0106    人骨髓瘤細(xì)胞/人漿細(xì)胞白血病細(xì)胞 NCI-H929      NCI-H929                                 

QY-HC0108    人胚肺成纖維細(xì)胞 HELF    HELF                                 

QY-HC0109    人飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞 HPT-8   HPT-8                                

QY-HC0110    人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650　   NCI-H1650　                            

QY-HC0111     人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661　 NCI-H661　                              

QY-HC0112    人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞 KU812   KU812                                【肝腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】

QY-HC0113    人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 MDA-MB-435      MDA-MB-435                            

QY-HC0114    人骨髓瘤細(xì)胞 OPM-2        OPM-2                               

QY-HC0115    人腺癌細(xì)胞 F56   F56                             

QY-HC0116    人SV－40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞 WI-38VA13       WI-38VA13