【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

1027281  AllStars Neg. Control siRNA (20 nmol)        CNY                                  

1026883  MagAttract Suspension G (1,6/2),KG          CNY                                  

1026577  DyeEx 2.0 Spin Kit (10)        CNY                                  

9234262  Frame, cooling, BR3000, 0           CNY                                  

9233477  8 Wash Head          CNY                                  

1062737  FastLane Cell cDNA Buffer Set (14x250ml)        CNY                                  

9232909  Board, Z2 motor            CNY                                  

9232907  Board, option, non-CE          CNY                                  

1061052  HBV Quantification Standards              CNY                                  

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9016537  Transportation box, BioSprint 96          CNY                                  

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9016267  BioRobot MDx Performance Upgrade Kit            CNY                            【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】  

9019184  Temp. Sensor, PyroQ96        CNY                                  

9019178  Opto - plate lock open, PyroQ96MD           CNY                                  

9019879  Label, cover, main, RG6        CNY                                  

9019876  Cover, main, red, RG6          CNY                                  

9019762  Fuse, 4A, 250VAC, V2, QX          CNY                                  

9019733  Motor, Z, V2, QX          CNY                                  

9019726  Transport lock, V2, QX        CNY                                  

9013404  Cable set, cooling system, 200             CNY                                  

9238803  Rect. sealing cap, clear, incl. clips        CNY                                  

9019653  Base Plate VPT, PyroQ96VW              CNY                                  

9019626  Tip ejector, Cx2            CNY                                  

9019603  Pins, locating, Mix ａnd Reagent set, CG1            CNY                                  

9019598  Lead, vac trap sensor, CX1          CNY                                  

9019573  Belt, X-axis assembly, CQx          CNY                                  

9019546  Clamp, cable, 3 wires 2 tabs, Cxx        CNY                                  

9019533  PCB, USB, QGY           CNY                            【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】  

9019518  RISER VACUUM 16.25MM          CNY                                  

217004    miRNeasy Mini Kit (50)        CNY                                  

204243    QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200)  For 200 x 50 ul reactions: 3 x 1.7 ml QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix,* 100 ul QuantiTect RT Mix, 2 x 2.0 ml RNase-free water  CNY                                  

QY-HC018      人肺成纖維細(xì)胞 HFL1 HFL1                                 

QY-HC020      人肝星形細(xì)胞 LX-2     LX-2                                  

QY-HC021      張氏肝細(xì)胞 Chang Liver      ChangLiver                                

QY-HC022      表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞 HepG2.2.15     HepG2.2.15                               

QY-HC023      人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827    HCC827                             

QY-HC024      人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460     NCI-H460                                 

QY-HC025      人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480     SW480                               

QY-HC026      人肝癌細(xì)胞 BEL-7404  BEL-7404                                  

QY-HC027      人胃癌細(xì)胞 NCI-N87   NCI-N87                             【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】

QY-HC028      人鼻咽低分化鱗癌細(xì)胞株 SUNE-1    SUNE-1                             

QY-HC029      人胚腎細(xì)胞 293[HEK-293；HEK293]　    293[HEK-293；HEK293]　                              

QY-HC030      人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞 hFOB 1.19     hFOB1.19                                  

QY-HC031      人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 BT474   BT474                                

QY-HC032      人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞NCI-h1688改為NCI-H292　      NCI-h1688改為NCI-H292　                                 

QY-HC033      人表皮癌細(xì)胞  A431    A431                                  

QY-HC034      人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-175      MDA-MB-175                            

QY-HC035      人宮頸癌細(xì)胞 HeLa     HeLa                                  

QY-HC036      人胃腺癌細(xì)胞 SGC-7901    SGC-7901                                 

QY-HC037      人食管癌細(xì)胞 EC9706 EC9706                              

QY-HC038      人食管癌細(xì)胞 ECA109 ECA109                             

QY-HC039      人卵巢癌細(xì)胞 SKOV3  SKOV3                              

QY-HC041      人肺癌細(xì)胞株 A549     A549                                  

QY-HC042      人骨肉瘤細(xì)胞 MG-63  MG-63                               

QY-HC043      人骨髓瘤細(xì)胞 U266U266B1 U266U266B1                             

QY-HC044      人骨髓瘤細(xì)胞 3T3D    3T3D                                  【食道腫瘤組織源性原代細(xì)胞總DNA】

QY-HC045      人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7  MCF-7                               

QY-HC046      人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 U-937    U-937                                

QY-HC047      人纖維肉瘤細(xì)胞 HT1080    HT1080                              

QY-HC048      人胚腎細(xì)胞 AD293      AD293                               

QY-HC049      人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞 ACC3    ACC3                                 

QY-HC050      人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞 DLD-1  DLD-1