【軟骨細胞總DNA】下面是細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當特別小心操作，并選擇適當?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【軟骨細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【軟骨細胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細胞培養(yǎng)代理品牌

細胞培養(yǎng)代理品牌

【軟骨細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標準品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

330421RT² Easy First Strand Kit (12)CNY

9010540Tischplatte Plato-7 (9194)CNY

68163DNeasy Plant Maxi Kit (24)24 DNeasy Maxi Spin Columns, 24 QIAshredder Maxi Spin Columns, RNase A, Buffers, Collection Tubes (50 ml)CNY

9012781Upgrade Y2K from Rufas 3.4 to WinrufasCNY

9010051Plate stackerCNY

60704QIAamp DSP Virus Kit (50),CECNY

59935#EpiTect MethyLight Assay Hs-TMEFF2(100)"10-fold primer TaqMan probe mix, for real-time MethyLight PCR

For TaqMan probe-based real-time quantification of methylated or unmethylated CpG sites"CNY

301807HiPerFect HTS Reagent (6 x 1 ml)CNY

301707HiPerFect Transfection Reagent (4x1 ml)CNY

59760EpiTect Fast 96 LyseAll Bisulfite KitCNY

206624Type-it CNV SYBR Green PCR Core Kit(400)CNY

9012739Peristaltic Pump outlet tubing 1.25CNY

133242NeXtalStock Sodium malonate pH 4.0 (200)CNY

133235NeXtalStock Sodium citrate pH 5.0 (200)CNY

59496EpiTect MethyLight PCR +ROX Kit (200)CNY

59305EpiTect MSP PCR Kit (100)CNY

59144EpiTect Plus FFPE Bisulfite Kit (48)CNY

929562QX Size Marker 250 bp - 4 kb v2.0(50 µl)CNY

929550QX DNA Size Marker pUC18/HaeIII (50 µl)CNY

929529QX Alignment Marker 50 bp/5 kb (1.5 ml)CNY

972824PyroMark Gold Q96 CDT Reagents (6 x 96)For performing pyrosequencing reaction on the Q96 MD in combination with the capillary dispensing tips (CDT)CNY

133222NeXtalStock Sodium ac. pH 4.0 (200)CNY

133219NeXtalStock Sodium ac. H2O (200)CNY

52926QIAamp Viral RNA Mini QIAcube Kit (240)CNY

9012692Source rack (128 pos) for tubes 16 mmCNY

9012665Pipetting system upgrade 1, BR3000CNY

9002022Rotor-Gene Q MDx 5plex PlatformCNY

970012PyroMark Q24 CpG p16 (4 x 24)For quantification of methylation level in  region +148 to +174 in exon 1 of the gene.CNY