【P388D1淋巴樣瘤】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實驗操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進(jìn)行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【P388D1淋巴樣瘤】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【P388D1淋巴樣瘤】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【P388D1淋巴樣瘤】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

4867004PG FMDV RT-PCR Kit (48) ZCNY

4870004PG Influenza A RT-PCR Kit (48) ZCNY

130907NeXtal DWBlock Anions SuiteCNY

4559263artus C.trachomatisPlus RG PCR Kit(24)CECNY

4601203artus Malaria RG PCR Kit (24) RUOCNY

4843024pg HPV PCR ASSAYCNY

130826NeXtal CubicPhase 3w Mo/C 8% µplate (10)CNY

130727NeXtal Tubes JCSG Core IV SuiteCNY

130703NeXtal Tubes Cryos SuiteCNY

129916QIAGEN RNase Inhibitor (500 reactions)"QIAGEN RNase Inhibitor is a protein of nonhuman origin that binds noncovalently to an inactivates a variety of ribonucleases (e.g., RNase A, B, ａnd C). It does not interfere with RNase T1,T2, H, U1, U2, or CL3. QIAGEN RNase Inhibitor is a polyclonal antibody which is highly active ａnd inhibits more than 90% of RNase activity, whereas HPRI (human placental RNase inhibitor) inhibits only 50%. For this reason, it can be used at lower concentrations compared to other RNase

inhibitors. In addition, QIAGEN RNase Inhibitor is stable over a wide pH ａnd temperature range ａnd at varying dithiothreitol (DTT) concentrations. QIAGEN RNase Inhibitor is supplied at a concentration of 4 units per microliter in 2 mM KH2PO4, 8.0 mM Na2HPO4, 3.0 mM KCl, 150 mM NaCl, pH 7.4, ａnd 50% glycerol."CNY

129115Nuclease-Free Water (1000 ml)CNY

4504263artus Parvo B19 RG PCR Kit (24) CECNY

4506203artus HBV RG PCR Kit (24) RUOCNY

4509005artus WNV LC RT-PCR Kit (96) RUOCNY

80311AllPrep DNA/RNA 96 Kit (4)CNY

76554RNAprotect Animal Blood Tubes 500µl (50)CNY

76163RNAlater TissueProtect Tubes (20x5ml)For stabilization of RNA in 20 x 500 mg tissue samples: 20 screw-top tubes containing 5 ml RNAlater RNA Stabilization Reagent eachCNY

74182RNeasy 96 Kit (12)For 12 x 96 total RNA preps: 12 RNeasy 96 Plates, Elution Microtubes CL (1.2 ml), Caps, RNase-free Reagents ａnd BuffersCNY

74136RNeasy Plus Mini Kit (250)CNY

28004MinElute PCR Purification Kit (50)50 MinElute Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)CNY

74124RNeasy Protect Mini Kit (50)RNAlater RNA Stabilization Reagent (50 ml), 50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd BuffersCNY

19588Elution Microtubes CL (24 x 96)CNY

19133QIAGEN Proteinase K (10)10 ml (>600 mAU/ml, solution)CNY

19076Buffer ATL200 ml Tissue Lysis Buffer for 1000 prepsCNY

19048EndoFree Plasmid Buffer SetBuffers P1, P2, P3, QBT, QC, QN, ER, TE, Endotoxin-free water, RNase A; for 10  plasmid mega- or 5 gigapreps (endotoxin-free)CNY

12961QIAGEN Plasmid Plus Maxi Sample Kit (5)QIAGEN Plasmid Plus Kits enable ultrafast, large-scale plasmid purification of pure plasmid DNA. The use of a vacuum manifold allows purification of up to 12 (Mega ａnd Giga) or up to 24 (Midi ａnd Maxi) samples in parallel with low hands-on needs. Low elution volumes yield highly concentrated plasmid DNA for direct use without ethanol precipitation. QIAGEN Plasmid Plus Kits also feature a novel wash buffer for endotoxin reduction.CNY

12243QIAfilter Plasmid Midi Kit (25)25 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers, 25 QIAfilter Midi CartridgesCNY

12123QIAGEN Plasmid Mini Kit (25)25 QIAGEN-tip 20, Reagents, BuffersCNY

133276NeXtalStock Spermine (100)CNY

4503065artus CMV LC PCR Kit (96) CECNY