【NCI-H838 [H838]人肺癌細胞 】下面是細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【NCI-H838 [H838]人肺癌細胞 】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【NCI-H838 [H838]人肺癌細胞 】五、培養(yǎng)方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細胞培養(yǎng)代理品牌

細胞培養(yǎng)代理品牌

【NCI-H838 [H838]人肺癌細胞 】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

204456QuantiFast Probe RT-PCR Kit(2000)CNY

204445QuantiTect Probe RT-PCR Kit (1000)For 1000 x 50 ul reactions: 25 ml QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix (providing a final concentration of 4 mM MgCl2), 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-free waterCNY

9015339RelayCNY

133048NeXtalStock HEPES free ac. pH 7.5 (200)CNY

9018399Cable, assy, power ON, QXCNY

9012083Rack for Eppendorf "snap top" tubesCNY

9001690Rotor-Gene Q 2Plex HRM no PCCNY

9001680Rotor-Gene Q 2Plex no PCCNY

133036NeXtalStock Ammonium tartrate (200)CNY

239085GelPilot 1 kb Ladder (100)Ready-to-use DNA marker, 600µl (100lanes), 9 fragments: 1000 – 10000 bpCNY

231222QIAGEN PCR Cloning plus Kit (10)For 10 reactions: 2x Ligation Master Mix (50 ul), pDrive Cloning Vector (0.5 ug), distilled water (1.7 ml), QIAGEN EZ Competent Cells (10 tubes, 50 ul each), SOC medium (2 x 1.9 ml)CNY

9015314Belts, Y-timing, v1 (2)CNY

133146NeXtalStock ADA pH 7.0 (200)CNY

133017NeXtalStock Ammonium iodide (200)CNY

1043367QIAamp MinElute Virus Accessory SetCNY

950154Wash Reagent (DXW) (650 ml)CNY

219000miScript Target ProtectorCNY

218411Human miScript Primer Assay Set VXX.XCNY

218200Custom miScript Primer Assay (100)CNY

27115QIAprep Spin Miniprep Columns (100)CNY

74034RNeasy Plus Micro Kit (50)CNY

73404RNeasy Plus Universal Tissue Mini Kit50CNY

20912Buffer QX1 Indikator (500 ml)500 ml Solubilization ａnd Binding Buffer (with pH indicator)CNY

19587Extension Tubes (3ml)CNY

69989Stainless Steel Beads 5 mm (200)Stainless Steel Beads, suitable for use with the TissueLyser systemCNY

69965TissueLyser Single-Bead Dispenser, 5mmCNY

19101RNase A (17500 U)2.5 ml (100 mg/ml; 7000 units/ml, solution)CNY

19053Buffer P3500 ml Neutralization BufferCNY

19015QIArack1 rack for 12 x QIAGEN-tip 20, 8 x QIAGEN-tip 100, 6 x QIAGEN-tip 500 or HiSpeed Midi Tips, 4 x QIAGEN-tip 2500 or HiSpeed Maxi Tips, or 10 x QIAfilter Midi or Maxi CartridgesCNY

12965QIAGEN Plasmid Plus Maxi Kit (100)QIAGEN Plasmid Plus Kits enable ultrafast, large-scale plasmid purification of pure plasmid DNA. The use of a vacuum manifold allows purification of up to 12 (Mega ａnd Giga) or up to 24 (Midi ａnd Maxi) samples in parallel with low hands-on needs. Low elution volumes yield highly concentrated plasmid DNA for direct use without ethanol precipitation. QIAGEN Plasmid Plus Kits also feature a novel wash buffer for endotoxin reduction.CNY