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ELISA試劑盒固相載體詳解-齊一生物
點(diǎn)擊次數(shù)：191 發(fā)布時(shí)間：2016/8/11 10:47:28
ELISA試劑盒固相載體
固相載體在 ELISA 測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，
不參與化學(xué)反應(yīng)�？勺� ELISA 中載體的材 料很多，*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原 吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑 料，可制成各種形式。 ELISA 載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板*為常用，專用 于 EILSA 的產(chǎn)品稱為 ELISA 板，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為 8×12 的 96 孔式。為便于作少 量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成 8 聯(lián)孔條或 12 聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA 板相同。
ELISA 板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn) 在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的 ELISA 檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步 驟，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的 吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值 較大。 良好的 ELISA 板應(yīng)該是吸附性能好， 空白值低，孔底透明度高，各板之間、 同一板各孔之間、 同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯 ELISA 板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品 的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號(hào)的 ELISA 板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法 為：以一定濃度的人 IgG（一般為 10ng/ml）包被 ELISA 板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀 釋度的酶標(biāo)抗人 IgG 抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測(cè)每孔溶液的吸 光度�？刂品磻�(yīng)條件，使各孔讀數(shù)在吸光度 0.8 左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀 數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于 10%。 與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為 ELISA 固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可 剪割，價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸 附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。 為比較不同固相在某一 ELISA 測(cè)定中的優(yōu)劣，
ELISA試劑盒可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：
用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選 出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定 的 ELISA 操作步驟進(jìn)行測(cè)定， 然后比較結(jié)果。 在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別， 這種載體就是這一 ELISA 測(cè)定項(xiàng)目的*合適的固相載體。 在 ELISA 中， 用作固相載體的小珠一般為直徑 0.6cm 的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大 大增加。ELISA 板孔的吸附面積約為 200mm2，小珠均為 1000mm2，將近 ELISA 板孔的 5 倍。 吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。 再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸 附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于*佳反應(yīng)狀態(tài)， 因此珠式 ELISA 的反應(yīng)往往更 為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌徹底，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過(guò)程中滾 動(dòng)淋洗，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較 差。 小試管作為固相載體也有較大的吸附表面，而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式 ELISA 的標(biāo)本量一般為 100-200ul，而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積，標(biāo)本反應(yīng)量的增加 有助于試驗(yàn)敏感性的提高。小試管還可以當(dāng)作比色杯，*后直接放入分光光度計(jì)中比色。 也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為 ELISA 固相載體的。其優(yōu)點(diǎn)是表面積極 大，反應(yīng)在懸液中進(jìn)行，其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為 ELISA 固相載體， 反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌方便，試劑盒一般均配以特殊儀器。
固相載體在 ELISA 測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，
不參與化學(xué)反應(yīng)�？勺� ELISA 中載體的材 料很多，*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原 吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑 料，可制成各種形式。 ELISA 載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板*為常用，專用 于 EILSA 的產(chǎn)品稱為 ELISA 板，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為 8×12 的 96 孔式。為便于作少 量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成 8 聯(lián)孔條或 12 聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA 板相同。
ELISA 板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn) 在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的 ELISA 檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步 驟，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的 吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值 較大。 良好的 ELISA 板應(yīng)該是吸附性能好， 空白值低，孔底透明度高，各板之間、 同一板各孔之間、 同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯 ELISA 板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品 的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號(hào)的 ELISA 板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法 為：以一定濃度的人 IgG（一般為 10ng/ml）包被 ELISA 板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀 釋度的酶標(biāo)抗人 IgG 抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測(cè)每孔溶液的吸 光度�？刂品磻�(yīng)條件，使各孔讀數(shù)在吸光度 0.8 左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀 數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于 10%。 與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為 ELISA 固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可 剪割，價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸 附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。 為比較不同固相在某一 ELISA 測(cè)定中的優(yōu)劣，
ELISA試劑盒可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：
用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選 出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定 的 ELISA 操作步驟進(jìn)行測(cè)定， 然后比較結(jié)果。 在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別， 這種載體就是這一 ELISA 測(cè)定項(xiàng)目的*合適的固相載體。 在 ELISA 中， 用作固相載體的小珠一般為直徑 0.6cm 的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大 大增加。ELISA 板孔的吸附面積約為 200mm2，小珠均為 1000mm2，將近 ELISA 板孔的 5 倍。 吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。 再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸 附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于*佳反應(yīng)狀態(tài)， 因此珠式 ELISA 的反應(yīng)往往更 為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌徹底，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過(guò)程中滾 動(dòng)淋洗，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較 差。 小試管作為固相載體也有較大的吸附表面，而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式 ELISA 的標(biāo)本量一般為 100-200ul，而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積，標(biāo)本反應(yīng)量的增加 有助于試驗(yàn)敏感性的提高。小試管還可以當(dāng)作比色杯，*后直接放入分光光度計(jì)中比色。 也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為 ELISA 固相載體的。其優(yōu)點(diǎn)是表面積極 大，反應(yīng)在懸液中進(jìn)行，其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為 ELISA 固相載體， 反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌方便，試劑盒一般均配以特殊儀器。
齊一生物科技（上海）有限公司，專業(yè)從事生物產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程技術(shù)公司！為廣大科研工作者、企業(yè)和學(xué)校提供質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的實(shí)驗(yàn)室用品，本公司主要經(jīng)營(yíng)ELISA酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、進(jìn)口原裝ELISA試劑盒、分子生物學(xué)檢測(cè)試劑盒、免疫學(xué)檢測(cè)試劑盒、各品牌原裝進(jìn)口抗體抗原、細(xì)胞菌株、生物培養(yǎng)基、生化試劑、實(shí)驗(yàn)耗材等多門類上萬(wàn)余種科研試劑產(chǎn)品！產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域！已迅速發(fā)展成為國(guó)內(nèi)科學(xué)試劑的運(yùn)營(yíng)商，是國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室指定供應(yīng)商，并與國(guó)內(nèi)多家科研單位緊密合作。產(chǎn)品已被中國(guó)科學(xué)家使用后在期刊<Cell>、<Nature>、<PNAS>、<Immunity>等上發(fā)表文章數(shù)超1000篇。
原創(chuàng)作者：齊一生物科技（上海）有限公司
