艾美捷Detroit R&D DNA損傷分析試劑盒#DD2H、#DD2M、#DD2R 包含DNA聚合酶、QPCR引物和dNTPs，real-time PCR的引物，以及用于real-time PCR定量的8.8kb real-time PCR標準品(不包括SYBR Green ｍaster mix for real-time PCR)。重復分析20個樣品（45個反應）。

整套試劑盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、細胞或組織。由于缺失和鏈斷裂造成的DNA損傷可以用此試劑盒檢測，使用微板格式的DNA分離技術，該試劑盒可以很容易地用于高通量格式。在這方面，Detroit R&D研發(fā)分析是一個很有途的工具，因為快速，操作簡單，只需要少量的測試物質。  

DNA損傷分析試劑盒為基礎研究和工業(yè)應用提供了強大的工具。這種創(chuàng)新的方法是基于在一個長（8.2-8.8 kb）的線粒體DNA丨片段上進行30個周期的定量PCR，然后使用實時PCR進行定量。    

左：實時PCR標準品擴增圖；右：實時PCR分析8.8kb線粒體DNA的標準曲線

候選藥物通常被生物轉化為有活性的毒性代謝物，通過COX-2過氧化物酶活性破壞DNA。Comet和OxyDNA檢測分別檢測斷裂DNA和氧化DNA。然而，候選藥物形成的數(shù)千種不同的DNAs，無法用這種方法檢測到。Detroit R&D開發(fā)了一種LQPCR檢測方法，用于檢測數(shù)千種不同候選藥物引起的DNA損傷修復缺陷，著色性干皮病A組（XPA）人成纖維細胞系致敏DNA損傷發(fā)生的候選藥物。表達COX-2的XPA細胞具有較強的COX-2催化活性。

LQPCR DNA損傷檢測的應用實例：

用一種已知的COX-2激活的DNA損傷劑benzo(a)pyrene-7,8-dihydrodiol (BPD)，COX-2過氧化物酶活性的底物- tert-butyl hydroperoxide (t-BOOH)處理表達COX-2的XPA細胞。采用LQPCR分析DNA損傷。如上圖柱狀圖所示，COX-2依賴性DNA損傷在BPD治療后顯著增加。   

除了細胞系統(tǒng)外，LQPCR DNA損傷測定還可用于新鮮或冷凍的組織或血液標本。因此，這種LQPCR DNA損傷試驗不僅可以用于篩選細胞內(nèi)的候選藥物，也可以用于篩選體內(nèi)的候選藥物。   

來源：https://www.amyjet.com/featured/mtdna-target.shtml