Ki67是正在進行的細胞增殖的內(nèi)在標(biāo)志物，存在于細胞周期的所有活性階段（G1-M）。這種抗體是多克隆的，在兔體內(nèi)被培養(yǎng)成人肽序列TPKEKAQALEDLAGFKLFQT，該序列在注射到兔體內(nèi)之通過戊二醛與甲狀腺球蛋白偶聯(lián)。該抗體已用于大鼠和人腦組織的免疫細胞化學(xué)。小瓶在1/100的稀釋度下含有約200ul。抗體可在BSA稀釋劑（50mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS）中進一步稀釋至至少1/20000�？贵w應(yīng)儲存在-20℃。還包括用特定肽吸收的濾紙，用于阻斷。可將500ul稀釋的抗體添加到管中以實現(xiàn)10uM的阻斷。在室溫（RT）下孵育至少1小時，然后施用于組織�？贵w與該肽特異性阻斷，而不與濾紙上吸收的其他肽阻斷。

Fluorochrome Ki67抗體（FC40001）基本操作：

新鮮冷凍的10-30微米切片在室溫下在4%多聚甲醛（FA）中固定1小時，在磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中洗滌，然后在90%的溫度下在10%檸檬酸鈉中處理40分鐘。將切片在檸檬酸鈉溶液中冷卻20分鐘，在PBS中洗滌，并用PBS中的0.1-0.3%H2O2孵育10至30分鐘。再次在PBS中洗滌組織，然后用Avidin/Biotin阻斷試劑盒（Vector cat#SP-2001）處理，在RT下洗滌并用BSA稀釋劑孵育1小時。在RT下將Ki67抗體（1/20000）施加到組織上過夜。在PBS洗滌后，將切片在生物素化GAR中以1/1000（Vector labs cat#BA1000）在RT下孵育1個小時，洗滌，然后在阿維丁/生物素（Avidin/Biotin）中以1/1000（Vector labs cat#PK6100）在室溫下孵育1小時。洗滌后，用二氨基聯(lián)苯胺（0.04%）在0.1M乙酸鈉中與0.06%H2O2混合六分鐘（也可以加入2.5%的氯化鎳）觀察信號。然后對切片進行水洗（如果需要，進行復(fù)染）、脫水并蓋上蓋子。

該抗體也適用于Fluorochrome的BRDU抗體可視化方案。可以使用4%FA灌注組織代替新鮮冷凍切片。

保存建議：

小瓶中含有約200微升1/100稀釋液。 抗體可在BSA稀釋液（50 mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS）中進一步稀釋至至少1/20，000。 抗體應(yīng)在-20 ℃下儲存。 還包括吸附有用于封閉的特異性肽的濾紙。 可向管中加入500 μ l稀釋的抗體以獲得10 μ M阻斷。 應(yīng)用于組織，在室溫（RT）下孵育至少1小時。 抗體特異性地與該肽阻斷，而不與吸附在濾紙上的其他肽阻斷。

Ki67抗體（FC40001）出版物：

Perez et al, The Journal of Neuroscience, May 13, 2009:29(19):6379-6387

Garcia-Fuster et al, in preparation: Individual differences in adult hippocampal neurogensis following experimenter administration of cocaine.