艾美捷G-Biosciences SAM510系列——SAM甲基轉(zhuǎn)移酶活性分析試劑盒，提供一種連續(xù)動力學酶偶聯(lián)測定方法，可連續(xù)監(jiān)測純化的SAM依賴性甲基轉(zhuǎn)移酶，而無需使用放射性標記或終點測量。 這是用于蛋白SAM甲基轉(zhuǎn)移酶的靈敏的酶偶聯(lián)試驗。  

艾美捷SAM甲基轉(zhuǎn)移酶活性分析試劑盒使用準備：

1.解凍SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定緩沖液和SAM甲基轉(zhuǎn)移蛋白測定室溫下的緩沖添加劑溶液。添加SAM的整個卷SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定緩沖液添加劑緩沖并充分混合。將SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定緩沖液儲存在室內(nèi)添加添加劑后，不要凍結(jié)。

2.陽性對照：腺苷同型半胱氨酸：小瓶中含有200µl的1mM腺苷同型半胱氨酸（AdoHcy）溶液。在冰上解凍小瓶。

3.SAM酶混合物，以300µl小瓶提供。每個小瓶適用于36次分析。解凍在冰上只需要您進行化驗所需的小瓶數(shù)量。不建議SAM酶混合物的重復冷凍/解凍。

4.S‐腺苷蛋氨酸（SAM），凍干供應。重新構(gòu)成用100µl HCl測定試劑[20mM]的小瓶，產(chǎn)生6.9mM SAM。每個小瓶適用于36次測定。不建議重復冷凍/解凍腺苷蛋氨酸溶液。

5.凍干的SAM比色混合物。添加1ml SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定向SAM比色混合物小瓶中加入添加劑的緩沖液。等待5分鐘，然后直到溶解。如果沒有使用所有SAM色度混合，建議等分成更小的小瓶，并在-70°C下儲存。

6.樣品制備：準備含有純化SAM的測試樣品根據(jù)您自己的標準，檢測依賴性甲基轉(zhuǎn)移酶協(xié)議避免使用還原劑和金屬螯合劑，因為它們具有對反應的抑制作用。如果存在這些試劑，建議使用O型管分析儀™ 針對0.1M Tris透析樣品的微型裝置鹽酸，pH8.0。

7.使用SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定緩沖液或您自己選擇的緩沖液。避免使用還原劑和金屬螯合劑，因為它們對反應。

艾美捷SAM甲基轉(zhuǎn)移酶活性分析試劑盒協(xié)議：

注：提供的陽性對照是SAM甲基轉(zhuǎn)移酶對照化驗一些受體底物、抑制劑、活化劑或緩沖組分可能干擾測定。強烈建議測試以下各項的兼容性使用陽性對照進行SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定的試劑將可疑的不相容試劑替換到陽性對照反應中。有必要滴定測定中的每個酶/底物系統(tǒng)，以確定佳條件。

注意：SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定中的脫氨酶需要存在于SAM甲基轉(zhuǎn)移酶測定緩沖液中的二價金屬離子。這個螯合劑（如EDTA）的存在會耗盡二價金屬離子并抑制脫氨酶。如果需要EDTA，則補充額外的錳離子進入反應。

注：還原劑，包括DTT、β-巰基乙醇和TCEP，具有對測定的抑制作用。如果存在，建議對0.1M Tris進行透析鹽酸，pH8.0。

SAM甲基轉(zhuǎn)移酶活性分析試劑盒測定范圍：

測定的檢測范圍為0.013‐0.133µmol/min/ml甲基轉(zhuǎn)移酶其相當于每分鐘0.01至0.1的吸光度。

圖1：SAM510測定定量測定陽性對照：50μM腺苷同型半胱氨酸（AdoHcy）。 

圖2：  人賴氨酸特異性組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET7/9 20µM TAF‐10作為受體底物。

參考文獻：

1. Cheng, X. ａnd Blumenthal, R.M. (1999) S‐Adenosylmethionine Dependent

Methyltransferases: Structures ａnd Functions, World Scientific, Singapore.

2. Schubert, H.L. et al. (2003) Trends Biochem. Sci 28: 329‐335.

3. Dorgan, K.M. et al. (2006) Anal. Biochem. 350:249‐255.

來源：https://www.amyjet.com/featured/SAM.shtml