Quantitate ａnd monitor intracellular cathepsin-B activity over time in vitro. The Magic Red substrate in this assay fluoresces red upon cleavage by active cathepsin enzymes. Analyze the fluorescent signal using fluorescence microscopy or a fluorescence plate reader.

Kit 937: 25 Tests

Magic Red Substrate (MR-RR2), 1 25 Test Vial, #6133

Hoechst 33342, 1 mL, #639

Acridine Orange, 0.5 mL, #6130

Kit Manual

Kit 938: 100 Tests

Magic Red Substrate (MR-RR2), 1 100 Test Vial, #6134

Hoechst 33342, 1 mL, #639

Acridine Orange, 0.5 mL, #6130

Kit Manual

艾美捷ICT 魔力紅組織蛋白酶B活性分析試劑盒原理：

將基質(zhì)直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中，孵育并分析。因?yàn)樗羌?xì)胞滲透性的，它很容易穿透細(xì)胞膜和內(nèi)部細(xì)胞器的膜——不需要裂解或滲透步驟。如果組織蛋白酶是活性的，魔紅底物被裂解，甲酰紫熒光團(tuán)將在激發(fā)時(shí)變?yōu)闊晒狻ｋS著酶活性的進(jìn)展和更多魔紅底物的裂解，信號(hào)將增強(qiáng)，使研究人員能夠觀察顏色隨時(shí)間的變化。樣品可通過(guò)熒光顯微鏡或熒光板讀取器進(jìn)行分析。試劑盒中包括Hoechst 33342和吖啶橙，分別用于檢測(cè)核形態(tài)和溶酶體細(xì)胞器結(jié)構(gòu)。

參數(shù)：

試劑名稱(chēng)MR-RR2

靶向組織蛋白酶B

激發(fā)/發(fā)射592 nm/628 nm

熒光板讀數(shù)器、熒光顯微鏡的分析方法

樣品類(lèi)型細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存2-8°C

艾美捷ICT 魔力紅組織蛋白酶B活性分析試劑盒準(zhǔn)備樣品和對(duì)照品：

通過(guò)加入DMSO重新配制魔力紅。

通過(guò)加入diH2O稀釋魔力紅1:10。

向每個(gè)樣品中加入20µL魔紅（約500µL培養(yǎng)細(xì)胞等分試樣）。

避光培養(yǎng)。

觀察顏色在15分鐘內(nèi)開(kāi)始顯現(xiàn)。

如果需要，用其他污漬標(biāo)記，如Hoechst、DAPI或抗體。

如果需要，修復(fù)單元格。

用熒光顯微鏡或熒光板讀取器進(jìn)行分析。魔力紅的佳激發(fā)波長(zhǎng)為592nm，發(fā)射波長(zhǎng)為628nm。

如果使用貼壁細(xì)胞，請(qǐng)參閱手冊(cè)了解其他方案。

魔力紅組織蛋白酶B活性分析試劑盒部分文獻(xiàn)參考：

Zhong, W;Rao, Z;Xu, J;Sun, Y;Hu, H;Wang, P;Xia, Y;Pan, X;Tang, W;Chen, Z;Zhou, H;Wang, X. Defective mihagy in aged macrophages promotes mitochondrial DNA cytosolic leakage to activate STING signaling during liver sterile inflammation. Aging Cell. 2022 May 22; doi: 10.1111/jcpe.13647. Abstract

Browning, CL;Green, A;Gray, EP;Hurt, R;Kane, AB. Manganese dioxide nanosheets induce mitochondrial toxicity in fish gill epithelial cells. Nanotoxicology. 2021 Jan 27; 1-18. doi: 10.1080/17435390.2021.1874562. Article

Lan J, Luo H, Wu R, Wang J, Zhou B, Zhang Y, Jiang Y, Xu J. Internalization of HMGB1 (High Mobility Group Box 1) Promotes Angiogenesis in Endothelial Cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2020 Dec;40(12):2922-2940. doi: 10.1161/ATVBAHA.120.315151. Epub 2020 Oct 1. Full Text

來(lái)源：https://www.amyjet.com/products/MC-062.shtml