FLIVO(FLuorescence in vIVO)探針是細胞滲透性、無毒性的天冬氨酸蛋白酶(Caspases)熒光抑制劑，含有纈氨酸－丙氨酸－天冬氨酸(VAD)氨基酸序列，該序列是活性Caspase的靶點,夾在熒光標記和氟甲基酮(FMK)之間。靜脈注射后，FLIVO通過體循環(huán)，在細胞中不斷擴散。如果細胞內(nèi)存在活性Caspase，FLIVO將與Caspase上的半胱氨酸形成不可逆的共價鍵。因此只要細胞膜完好，結(jié)合的FLIVO探針就會留在細胞內(nèi)，從而被標記上熒光，未結(jié)合的FLIVO則在動物的體循環(huán)中被清除，動物體內(nèi)剩下的信號就是對caspase活性的直接測定。所以FLIVO可以用于檢測活體動物體內(nèi)Caspase介導的細胞凋亡、焦亡。FLIVO非常敏感，自然發(fā)生的低水平細胞凋亡也會被檢測到。  

艾美捷ICT FLIVO探針活體凋亡檢測,包含的FLIVO探針由熒光基團、VAD序列和氟甲基酮(FMK)組成夾心結(jié)構(gòu)，熒光基團用來檢測熒光，VAD序列是活性caspase靶點，FMK有助于與活性caspase形成共價鍵。  

圖1：利用FAM-FLIVO監(jiān)測細胞死亡，健康神經(jīng)元和凋亡神經(jīng)元之間有明顯的區(qū)別。在對糖尿病的活體動物大腦研究中，對照大鼠(左)和8周STZ糖尿病大鼠(右)的caspase活性來評估神經(jīng)退行性變。在大鼠死亡30分鐘靜脈注射FAM-FLIVO(#981)，直接標記caspase陽性凋亡神經(jīng)元。死亡后，制備20um冰凍切片的導水管周圍灰質(zhì)(PAG)，用紅色熒光Nissl反染色，以識別所有神經(jīng)元。瀕死的凋亡神經(jīng)元(左)顯示FAM-FLIVO(黃/綠色)和Nissl(紅色)雙重染色。在該模型中，糖尿病動物導水管周圍灰質(zhì)中caspase活性水平高于對照組動物。 

圖2：在小鼠腦內(nèi)接種活金黃色葡萄球菌后誘發(fā)腦膿腫。動物在感染后17小時靜脈注射NIR-FLIVO 690示蹤劑(#9112)或NIR-FLIVO 690游離染料對照劑(#9113)，然后在1小時后使用IVIS Spectrum從離體大腦組織中獲得信號。在注射NIR-FLIVO 690示蹤劑(右圖)后，強烈的caspase活性與腦膿腫相關(guān)，而在注射NIR-FLIVO 690游離染料對照劑(左圖)的動物中檢測到少的信號。

圖3：使用CRi Maestro成像系統(tǒng)，使用NIR-FLIVO 747示蹤劑(#9114)對小鼠腫瘤模型中的凋亡組織進行體內(nèi)成像。NIR-FLIVO 747示蹤劑用于無創(chuàng)監(jiān)測一種實驗性抗癌治療的療效和時間動力學。在接受安慰劑或?qū)嶒炛委熀�，陰性對照小�?span style="font-family: Calibri;">(左圖)和實驗治療小鼠(右圖)靜脈注射NIR-FLIVO 747示蹤劑，并在不同時間點使用CRi Maestro成像系統(tǒng)進行無創(chuàng)成像。實驗組被試的凋亡腫瘤組織呈亮藍色熒光，表明實驗治療有凋亡效應。

以上，是有關(guān)于艾美捷FLIVO探針活體凋亡檢測的相關(guān)研究方案。

來源：https://www.amyjet.com/featured/in-vivo.shtml