該試劑盒提供了比色形式測(cè)量和監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖，含有足夠的試劑用于評(píng)估在96孔板中進(jìn)行960次測(cè)定或在24孔板中進(jìn)行192次測(cè)定。細(xì)胞可以被鍍，然后用影響增殖的化合物或藥劑。然后用增殖試劑檢測(cè)細(xì)胞，在活細(xì)胞中由黃色四唑MTT轉(zhuǎn)化為紫色福爾馬贊形式細(xì)胞還原酶。細(xì)胞增殖的增加伴隨著信號(hào)的增加，雖然細(xì)胞增殖（和信號(hào)）的減少可以表明化合物的毒性作用或次優(yōu)的培養(yǎng)條件。該測(cè)定原理是基本的，可應(yīng)用于大多數(shù)真核生物細(xì)胞系，包括貼壁和非貼壁細(xì)胞以及某些組織。這種細(xì)胞增殖試劑可用于檢測(cè)細(xì)菌，酵母，真菌，原生動(dòng)物以及培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物中的增殖和魚(yú)細(xì)胞。

艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒結(jié)果示例：

下圖顯示了CytoSelect的典型結(jié)果™ MTT細(xì)胞增殖試驗(yàn)。以下數(shù)據(jù)僅供參考。該數(shù)據(jù)不應(yīng)于解釋實(shí)際后果 

圖：人HEK 293細(xì)胞密度。HEK 293細(xì)胞以不同密度接種并允許其生長(zhǎng)24小時(shí)。加入CytoSelect MTT細(xì)胞增殖后測(cè)定試劑，然后將細(xì)胞在37℃和5%CO2下孵育3小時(shí)，并用

洗滌劑溶液3小時(shí)。

艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒測(cè)定方案：

1.制備含有0.1-1.0 x 106的細(xì)胞懸液培養(yǎng)基中的細(xì)胞/ml。

2.將每孔100μL加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或每孔500μL加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)物中有或沒(méi)有待測(cè)化合物的板。細(xì)胞在37°C和5%培養(yǎng)24-96小時(shí)加濕培養(yǎng)箱中的二氧化碳。

3.加入10μlCytoSelect™ MTT細(xì)胞增殖測(cè)定試劑，如果使用96-孔板，或24孔板的每個(gè)孔50µL。

4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小時(shí)，直至可見(jiàn)紫色沉淀（細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下可以更精確地觀察到沉淀物）

5.在96孔板的每孔中加入100μL去污劑溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污劑溶液盤(pán)子。

6.在室溫下孵育2小時(shí)至避光過(guò)夜。

注意：在井中與洗滌劑溶液長(zhǎng)時(shí)間孵育可能導(dǎo)致沉淀或渾濁可以增加背景。如果觀察到沉淀，將板在37℃加熱10-20分鐘并攪拌溶解沉淀物。

7.使用540-570nm作為主波長(zhǎng)讀取吸光度。

引用文獻(xiàn)（部分）：

1. Yu, Z. et al. (2021). Receptor interacting protein 3 kinase, not 1 kinase, through MLKL-mediated necroptosis is involved in UVA-induced corneal endothelium cell death. Cell Death Discov.

7(1):366. doi: 10.1038/s41420-021-00757-w.

2. Koga, Y. et al. (2021). DNA-Aptamer Raised against Receptor for Advanced Glycation End Products Improves Survival Rate in Septic Mice. Oxid Med Cell Longev. 2021:9932311. doi:10.1155/2021/9932311.

3. Uranowska, K. et al. (2021). A chondroitin sulfate proteoglycan 4‑specific monoclonal antibody inhibits melanoma cell invasion in a spheroid model. Int J Oncol. 59(3):70. doi:10.3892/ijo.2021.5250.

來(lái)源：https://www.amyjet.com/products/CBA-252.shtml