細(xì)胞裂解活性是清除細(xì)胞內(nèi)病原體和癌細(xì)胞的重要過程。ICT的總細(xì)胞毒性檢測試劑盒允許您評估細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞溶解活性�？偧�(xì)胞毒性測定試劑盒包括三種熒光試劑：CFSE、7-AAD和SR-FLICA。CFSE是一種綠色熒光膜染色劑，用于識別目標(biāo)細(xì)胞群。加入未染色的效應(yīng)細(xì)胞并與靶細(xì)胞孵育。SR-LFICA試劑與細(xì)胞一起孵育以鑒定那些含有活性胱天蛋白酶的細(xì)胞。然后加入7-AAD，一種紅色熒光活/死染色劑，通過結(jié)合膜受損細(xì)胞的DNA將所有壞死細(xì)胞染成紅色。通過流式細(xì)胞術(shù)，量化四種細(xì)胞群：活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞�？偧�(xì)胞毒性試劑盒中的這種進(jìn)一步的細(xì)胞分化導(dǎo)致更準(zhǔn)確的細(xì)胞溶解活性評估。

ImmunoChemistry艾美捷總細(xì)胞毒性試驗(yàn)試劑盒化學(xué)性質(zhì)：

試劑名稱7-AAD、CFSE、SR-VAD-FMK

靶細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，多胱天蛋白酶

激發(fā)/發(fā)射7-AAD–546 nm/647 nm CFSE–492 nm/520 nm SR-FLICA–565 nm/600 nm

分析方法流式細(xì)胞術(shù)

樣品類型細(xì)胞培養(yǎng)

存儲CFSE≤ -20°C，2-8°C時的其他部件

協(xié)議：

準(zhǔn)備樣品和對照品

用diH2O稀釋1:10的分析緩沖液并過濾消毒。

用200µL DMSO重新配制CFSE，并用1X測定緩沖液稀釋1:250。

向目標(biāo)細(xì)胞中加入200µL CFSE，使其呈綠色，并在室溫下孵育15分鐘。

清洗目標(biāo)細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度。

向靶細(xì)胞中加入效應(yīng)細(xì)胞并孵育4-6小時。

用100µL DMSO重組SR-FLICA并稀釋1:12.6。

添加10µL SR-FLICA，將凋亡細(xì)胞標(biāo)記為橙紅色，并在37°C下孵育45分鐘。

用260µL DMSO重組7-AAD，并用1X測定緩沖液稀釋1:10。

加入20µL 7-AAD標(biāo)記壞死細(xì)胞為紅色，并在冰上孵育10分鐘。

運(yùn)行對照并用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。通過分析FL-1（綠色）與FL-3（紅色）來識別目標(biāo)細(xì)胞。創(chuàng)建FL-2（橙色-紅色）與FL-3（紅色）的繪圖。CFSE在492nm激發(fā)，在520-540nm發(fā)射；7-AAD在546nm激發(fā)并在647nm發(fā)射；SR-FLICA在565nm激發(fā)，在600nm發(fā)射。

ImmunoChemistry艾美捷總細(xì)胞毒性試驗(yàn)試劑盒組分：

Kit 971: 125 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 1 vial, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 1 vial, #6163

10X Assay Buffer, 30 mL, #6161

Kit Manual

Kit 972: 250 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 2 vials, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 2 vials, #6163

10X Assay Buffer, 60 mL, #685

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies簡稱"ICT",提供各種細(xì)胞蛋白酶、細(xì)胞凋亡與細(xì)胞毒性檢測試劑盒等研究工具，同時包含高質(zhì)量高靈敏度的 ELISA開發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml