This kit is ideal for users who want a convenient ａnd sensitive assay. The assay is designed for the enumeration of cells secreting mouse TNF-α. The kit includes ELISpot plates pre-coated with monoclonal antibody, biotinylated detection antibody, Streptavidin-ALP ａnd ready-to-use BCIP/NBT-plus substrate.

Pre-coated plates reduce assay time ａnd minimize variability.

艾美捷小鼠腫瘤壞死因子α-ELISpot試劑盒基本參數(shù)：

中文名稱：小鼠腫瘤壞死因子α-ELISpot試劑盒

英文名字：ELISpot Plus: Mouse TNF-alpha (ALP)

編號：3511-4APW-2

規(guī)格：2plates

應(yīng)用程序：ELISpot

反應(yīng)性：老鼠

BCIP/NBT加基質(zhì)（25 ml）

檢測抗體在含0.02%疊-氮化鈉的無菌過濾（0.2μm）PBS中提供。Streptavidin ALP以0.1M Tris緩沖液和0.002%Kathon CG提供。小瓶已過滿，以確�；厥找�(guī)定量。

存儲：在環(huán)境溫度下運輸。到達時，所有試劑應(yīng)在4-8°C下冷藏儲存。板材應(yīng)保持在室溫下。

艾美捷小鼠腫瘤壞死因子α-ELISpot試劑盒使用指南：

A ELISpot板的制備（無菌條件）

1.從密封包裝中取出平板，用無菌PBS（200μl/孔）洗滌4次。

2.用含有10%與細胞懸浮液相同血清的培養(yǎng)基（200μl/孔）調(diào)節(jié)平板。在室溫下培養(yǎng)至少30分鐘。

B在平板中培養(yǎng)細胞（無菌條件）

1.取出培養(yǎng)基，加入刺激物，然后加入細胞懸浮液�；蛘�，細胞和刺激物可以在加入平板之混合。

2.將平板置于37°C的含5%CO2的加濕培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12-48小時。在此期間不要移動板，并采取措施避免蒸發(fā)（例如，用鋁箔包裹板）。

C斑點檢測

1.通過清空平板去除細胞，并用PBS（200μl/孔）洗滌5次。

2.在含有0.5%胎牛血清（PBS-0.5%FCS）的PBS中將檢測抗體（MT11B10生物素）稀釋至0.5μg/ml。加入100μl/孔，在室溫下孵育2小時。

3.如上所述清洗板（步驟C1）。

4.將Streptavidin ALP（1:1000）在PBS-0.5%FCS中稀釋，并加入100μl/孔。在室溫下孵育1小時。

5.如上所述清洗板（步驟C1）。

6.通過0.45μm過濾器過濾即用基質(zhì)溶液（BCIP/NBT plus），并添加100μl/孔。直到出現(xiàn)明顯的斑點。

7.通過在自來水中大量沖洗來阻止顏色發(fā)展。如果需要，移除暗渠（板下的軟塑料）并沖洗膜的下側(cè)。

8.讓盤子保持干燥。在ELISpot讀取器或解剖顯微鏡中檢查和計數(shù)斑點。

9.在室溫下將盤子存放在黑暗中。

來源：https://www.amyjet.com/products/3511-4APW-2.shtml