CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應性免疫防御系統(tǒng)，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在基因的定點修飾中展現(xiàn)出巨大的應用潛能。脫靶效應是目 CRISPR/Cas9 技術(shù)應用的一個難題，在基因編輯應用中，可能會出現(xiàn)難以預測的后果。

Cas9 Nuclease 具有兩個切割活性中心，從而實現(xiàn)在 sgRNA 靶序列特定位點引入 DNA 雙鏈斷裂（DSB）。NLS-Cas9（D10A）Nickase 在 Cas9 Nuclease 基礎(chǔ)上突變其中一個切割活性中心，其能在與 sgRNA 靶序列互補的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，并且通過在蛋白兩端加了核定位序列(NLS),可把蛋白送到細胞核內(nèi)進行基因組編輯， 配合一對 gRNA 使用，可實現(xiàn) Cas9 Nuclease 相同的基因編輯效果，由于有效的識別序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明顯減少意外的脫靶基因修飾，從而顯著提高 CRISPR/Cas9 技術(shù)基因修飾的特異性。

艾美捷nickases內(nèi)切酶特點：

純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時引入質(zhì)�；虿《靖蓴_； 可顯著降低脫靶效應。

艾美捷nickases內(nèi)切酶用途：

1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；

2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；

3，sgRNA 剪切靶點 DNA 效率檢測，降低體內(nèi)篩選成本；

4，體外剪切靶 DNA 的特異位點。

艾美捷nickases內(nèi)切酶應用實例：

帶有靶位點的超螺旋 DNA（cccDNA）；

酶切產(chǎn)生切刻后的開環(huán) DNA（ocDNA）；

50 -100 ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。

來源：https://www.amyjet.com/products/P7057.shtml