膜聯(lián)蛋白V是具有血管抗凝血活性的鈣和磷脂結(jié)合蛋白家族的成員。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，它可能通過與凝血酶原競(jìng)爭(zhēng)磷脂酰絲氨酸（PS）結(jié)合位點(diǎn)而在抑制凝血中發(fā)揮作用。在健康細(xì)胞中，PS通常保存在細(xì)胞膜的內(nèi)小葉（胞質(zhì)側(cè)）。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，早的可檢測(cè)指標(biāo)是膜不對(duì)稱性的喪失。PS不再局限于膜的胞質(zhì)部分，而是轉(zhuǎn)移到外小葉，并暴露在細(xì)胞表面。通過我們的Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒，免疫化學(xué)技術(shù)提供了一種經(jīng)驗(yàn)證的方法，可以使用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）試劑快速、輕松地區(qū)分兩種死亡細(xì)胞和活細(xì)胞。細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜完整，PS表面暴露，Annexin V-FITC染色呈陽性。PI包含在凋亡檢測(cè)試劑盒中，用于識(shí)別晚期凋亡和壞死細(xì)胞，這些細(xì)胞已失去質(zhì)膜完整性。這些細(xì)胞將被膜聯(lián)蛋白V-FITC和碘化丙啶雙重標(biāo)記（綠色和紅色熒光）。假設(shè)沒有治療或細(xì)胞周期相關(guān)事件暫時(shí)暴露正常內(nèi)化的帶負(fù)電荷的PS實(shí)體，則具有完整質(zhì)膜的活細(xì)胞將排除PI并保持不被膜聯(lián)蛋白V-FITC探針染色。該試劑盒還包括一種特殊配制的鈣基結(jié)合緩沖液，這是發(fā)生膜聯(lián)蛋白V結(jié)合所必需的。

艾美捷Immunochemistry Annexin V-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒化學(xué)性質(zhì)：

靶細(xì)胞凋亡，暴露的磷脂酰絲氨酸

激發(fā)/發(fā)射488nm/530 nm

分析方法流式細(xì)胞術(shù)

樣品類型細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存2-8°C

協(xié)議：

準(zhǔn)備樣品和對(duì)照品

用diH2O稀釋10X結(jié)合緩沖液1:10。

在冰冷的培養(yǎng)基或PBS中洗滌細(xì)胞，并重新懸浮在冰冷的1X結(jié)合緩沖液中。

在PBS中稀釋膜聯(lián)蛋白V-FITC 1:10。

在PBS中稀釋碘化丙啶（PI）1:2。

將稀釋的Annexin V-FITC以1:20的比例添加到每個(gè)樣品中（每100µL培養(yǎng)細(xì)胞等分試樣5µL）。

將稀釋的PI以1:20的比例添加到每個(gè)樣品中（每100µL培養(yǎng)細(xì)胞等分試樣5µL）。

培養(yǎng)約10分鐘，避光。

通過向每個(gè)樣品中添加250µL 1X結(jié)合緩沖液來稀釋樣品。

用流式細(xì)胞儀分析。膜聯(lián)蛋白V-FITC在494nm處佳激發(fā)，在519nm處發(fā)射（通常在FL1中讀�。�。PI在536nm處佳激發(fā)并且在617nm處具有峰值發(fā)射（通常在FL3中讀�。�。

艾美捷Immunochemistry Annexin V-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒組分：

Annexin V-FITC, 200X, 50 µL, 1 vial, #6340

10X Binding Buffer, 1.7 mL, 3 vials, #6341

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies簡(jiǎn)稱"ICT",提供各種細(xì)胞蛋白酶、細(xì)胞凋亡與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒等研究工具，同時(shí)包含高質(zhì)量高靈敏度的 ELISA開發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml