支原體檢測試劑盒中的PCR技術(shù)快速（結(jié)果通常在不到3小時內(nèi)獲得）且易于使用。工具包也高度敏感，可在100µL測試樣品上清液中檢測到低至2-5毫微克的支原體DNA。真核生物的并且來自細(xì)胞培養(yǎng)上清液的細(xì)菌DNA不被試劑盒擴(kuò)增。感染支原體的樣本細(xì)胞系將在瓊脂糖凝膠上產(chǎn)生約448bp至約611bp的PCR產(chǎn)物，具體取決于支原體的類型。包括陽性對照（M.orale，503bp），以驗(yàn)證PCR擴(kuò)增過程具有以及確認(rèn)在測試樣品中獲得的PCR產(chǎn)物的大小。還提供內(nèi)部控制以消除與PCR抑制劑相關(guān)的潛在假陰性。

艾美捷支原體檢測試劑盒建議的方案：

•試劑制備

o離心所有組件管，以確保材料完全沉降到底部

o使用不含DNase的水重新配制底漆/dNTP混合物、陽性和內(nèi)部對照，如下所示-

底漆/dNTP混合物-260µL

陽性對照-200µL

內(nèi)部控制-200µL

o渦流5，以確保充分混合并在室溫下平衡5分鐘

o渦流，然后再次離心

o重組試劑應(yīng)儲存在-20°C或以下；避免多次冷凍/解凍循環(huán)

•樣品制備

o將100μL細(xì)胞培養(yǎng)上清液*轉(zhuǎn)移到無菌的200μL PCR管中；確保蓋子密封嚴(yán)實(shí)，以防

蒸發(fā)

o將樣品上清液在95°C下加熱5分鐘

o以大速度快速旋轉(zhuǎn)樣品上清液5，以去除細(xì)胞碎片；上清液現(xiàn)在

準(zhǔn)備加入PCR主混合物

*該試劑盒為從細(xì)胞培養(yǎng)上清液中檢測支原體而設(shè)計(jì)。對于血清或細(xì)胞裂解物樣品，DNA

建議在測試提取，以避免PCR抑制。

•熱循環(huán)計(jì)劃

•PCR主混合

•瓊脂糖凝膠電泳

•凝膠評價(jià)

•如果樣品的PCR被抑制，則可以通過進(jìn)行DNA分析來輕松去除抑制劑

艾美捷支原體檢測試劑盒樣本數(shù)據(jù)：

相關(guān)文獻(xiàn)：

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來源：https://www.amyjet.com/products/13100-01.shtml