NINDS的Susan Cheng博士和合作者已經(jīng)改進(jìn)了他們的包埋程序，使用Nanogold®-Fab＇和HQ銀進(jìn)行J均勻、一致和可靠的包埋標(biāo)記。

用戶在使用該方案時(shí)發(fā)現(xiàn)了：

與其他方法相比，金標(biāo)記的密度更高。

非常高的特異性。

J大的分辨率。

Tanner和他的同事已經(jīng)描述了這個(gè)程序，據(jù)報(bào)道，與其他方法相比，這個(gè)程序可以得到明顯更高密度的銀增強(qiáng)的金納米粒子。下面是一個(gè)結(jié)果的例子。

圖：Nanogold®:-Fab＇山羊抗兔IgG（目錄#2004）標(biāo)記大鼠大腦中的K+通道Kv2.1亞基，然后用HQ銀（目錄#2012）增強(qiáng)。注意免疫染色的高密度和特異性，甚至闡明了亞單位定位在細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)側(cè)和高爾基體的外堆；軸突和終端明顯是陰性的。由J.Du, J.-H. Tao-Cheng, P.Zer.完成的工作。Tao-Cheng, P. Zerfas, ａnd C. J. McBain, NIH完成。見神經(jīng)科學(xué)，84，37-48（1998）Bar 1微米。

Nanoprobes艾美捷DPPE-NANOGOLD材料和試劑：

磷酸鈉緩沖液。0.1M磷酸鈉，pH值調(diào)整為7.4。

磷酸鹽緩沖液（PBS）緩沖液。0.02M磷酸鈉緩沖液與0.15M氯化鈉，pH值調(diào)整為7.4。

磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）緩沖液。0.02M磷酸鈉緩沖液加0.15M氯化鈉，pH值調(diào)至7.4，含(a)5%牛血清白蛋白和0.05至0.1%疊氮鈉；和(b)1%山羊血清和0.1%NaN3，3-4 X 5 min

戊二醛和多聚甲醛。

HQ銀試劑（Nanoprobes）。

去離子水或蒸餾水。

Nanoprobes艾美捷DPPE-NANOGOLD協(xié)議：

用以下方法固定約45分鐘（對于單層培養(yǎng)物）。(1) 在0.1M磷酸鈉緩沖液中的4%多聚甲醛，pH7.4，或(2) 在0.1M磷酸鈉緩沖液中的2%多聚甲醛與0.05% - 0.1%戊二醛，pH7.4。

用0.1M磷酸鈉緩沖液，pH7.4清洗，3次，每次5分鐘。

用含5%山羊血清、0.1%疊氮鈉和0.1%皂素的PBS阻斷和通透細(xì)胞1小時(shí)。

用含有5%正常山羊血清、0.1%皂素和0.1%疊氮鈉的PBS制成的抗體在室溫下孵育1小時(shí)。

用含1%山羊血清和0.1%疊氮鈉的PBS洗3-4 x 5分鐘。

在1毫升含有1%山羊血清和0.1%疊氮鈉的PBS中，用Nanogold標(biāo)記的Fab＇抗兔或小鼠（取決于一抗體）二抗體結(jié)合物（4升）孵育1小時(shí)，室溫下。

用含有1%山羊血清和0.1%疊氮鈉的PBS清洗，一次，然后用PBS清洗，兩次。

用PBS中的2%戊二醛固定30分鐘。

用PBS洗3次。儲存過夜。

第二天用水徹底清洗。

進(jìn)行銀增強(qiáng)（HQ銀增強(qiáng)試劑盒，Nanoprobes, NY）。

用水清洗。在LM下仔細(xì)檢查；只對有希望的標(biāo)本進(jìn)行EM處理。

在0.1M磷酸鹽緩沖液中清洗，pH7.4。

在0.1M磷酸鹽緩沖液中加入0.2%的OsO4，30分鐘。

清洗，用乙酸鈾染色，在乙醇中脫水，然后嵌入。

Nanoprobes特色熒光納米金探針在一個(gè)探針中結(jié)合了納米金（Nanogold）和熒光素，用于熒光和電鏡兩種技術(shù)共同進(jìn)行樣品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html