艾美捷焦磷酸(PPi)分析試劑盒提供了J為強(qiáng)大的分光光度法來測(cè)量焦磷酸鹽。該試劑盒使用有的熒光焦磷酸酯傳感器，其熒光強(qiáng)度與焦磷酸酯的濃度成比例關(guān)系。與磷酸鹽和ATP相比，

本試劑盒中使用的PPi傳感器對(duì)PPi具有相當(dāng)高的選擇性。與需要至少兩種酶來檢測(cè)焦磷酸的酶偶聯(lián)法相比，該檢測(cè)方法要簡(jiǎn)單得多，也更穩(wěn)定。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析試劑盒提供了測(cè)定焦磷酸的所有基本成分。本試劑盒已成功用于高通量篩選（HTS）。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析試劑盒組分：

組份A：檢測(cè)緩沖液 1瓶（25mL）

成分B: PPi傳感器 1小瓶（凍干粉）。

組份C：焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 1瓶（1mL，50mM）。

成分D: DMSO 1小瓶（100微升）

摘要：

準(zhǔn)備好PPi傳感器工作溶液（50微升）

加入焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和/或檢測(cè)樣品（50 µL）。

在室溫下孵育10至30分鐘

在 Ex/Em = 370/470 nm（截止點(diǎn) = 455 nm）處監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。

重要說明

在開始實(shí)驗(yàn)在室溫下解凍所有試劑盒成分。

儲(chǔ)備液的制備：

除非另有說明，所有未使用的原液應(yīng)分成一次性使用的等分，并在制備后儲(chǔ)存在-20℃。避免反復(fù)冷凍-解凍循環(huán)。

1. PPi 傳感器儲(chǔ)備溶液（200X）。

將 50µL DMSO（成分 D）加入到 PPi 傳感器（成分 B）的小瓶中，制成 200X 的 PPi 傳感器儲(chǔ)備溶液。注意：25 µL 的 PPi 傳感器儲(chǔ)備液足夠用于一個(gè) 96 孔板。

制備 1 mM 焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液，將 10 µL 50 mM 焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液（成分 C）加入 490 µL 檢測(cè)緩沖液（成分 A），或您選擇的緩沖液（丨好是 50 mM Hepes 緩沖液，pH 7）中，制成 1 mM 焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液。取1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（PS7）進(jìn)行1:3的連續(xù)稀釋，得到用檢測(cè)緩沖液（成分A）連續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（PS6-PS1）。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析試劑盒工作溶液的制備：

將 25 µL 200X PPi 傳感器儲(chǔ)備液加入到 5 mL 檢測(cè)緩沖液（成分 A）中，并充分混合。注意：由于該檢測(cè)方法對(duì) PPi 的高度敏感性，使用不含 PPi 的實(shí)驗(yàn)器具和試劑非常重要。注意：DTT（1uM）會(huì)增加背景，MgCl2≥2mM會(huì)降低反應(yīng)。

圖：焦磷酸鹽、ATP和磷酸鹽的劑量反應(yīng)是用焦磷酸(PPi)分析試劑盒在純黑色96孔板中用熒光微板閱讀器測(cè)量的。

艾美捷焦磷酸(PPi)分析試劑盒部分引文：

1.Biological studies ａnd target engagement of the 2-C-methyl-d-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1 R, 3 S)-MMV008138 ａnd analogs

Authors: Ghavami, Maryam ａnd Merino, Emilio F ａnd Yao, Zhong-Ke ａnd Elahi, Rubayet ａnd Simpson, Morgan E ａnd Fern{\＇a}ndez-Murga, Maria L ａnd Butler, Joshua H ａnd Casasanta, Michael A ａnd Krai, Priscilla M ａnd Totrov, Maxim M ａnd others,

Journal: ACS infectious diseases (2017): 549－－559

2.Structural Insights into Inhibition of Escherichia coli Penicillin-binding Protein 1B

Authors: King, Dustin T ａnd Wasney, Gregory A ａnd Nosella, Michael ａnd Fong, Anita ａnd Strynadka, Natalie CJ

Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): 979－－993

3.Biological studies ａnd target-engagement of the 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1R, 3S)-MMV008138 ａnd analogs

Authors: Ghavami, Maryam ａnd Merino, Emilio Fern ａnd o , undefined ａnd Yao, ZhongKe ａnd Elahi, Rubayet ａnd Simpson, Morgan ａnd Fern, undefined ａnd ez-Murga, Maria ａnd Butler, Joshua Hayden ａnd Casasanta, Michael ａnd Krai, Priscilla ａnd Totrov, Maxim ａnd others, undefined

Journal: ACS Infectious Diseases (2017)

來源：https://www.amyjet.com/products/AAT-21614.shtml