在這里，艾美捷Jackson詳細介紹了如何建立多重標記實驗，以及執(zhí)行成功分析所需的一些注意事項。

圖：小鼠GFAP（綠色）、NF（紅色）、膠原蛋白IV（灰色）、波形蛋白（藍色）z1。圖片由加州大學圣巴巴拉分校神經科學研究所Gabe Luna提供。

Jackson丨艾美捷：設計多重標記實驗

同時檢測一種以上抗原的抗體選擇取決于至少兩個重要標準：

Jackson丨艾美捷：二抗體的可用性不識別

彼此（來自相同的寄主物種），

分析系統(tǒng)中使用的其他初抗體，

研究中的組織或細胞中存在內源性免疫球蛋白。

使用分辨率良好的探針（酶反應產物、熒光團或電子致密顆粒）。

多標簽協(xié)議生成器

這個工具可以幫助你設計實驗。它將應用上述標準來確定一抗體之間的潛在交叉反應性，從而確定每個二抗體所需的zui小交叉反應性。

輸入樣本的種類和您打算使用的抗體。優(yōu)先對所有二抗體使用相同的宿主物種，以zui小化交叉反應的可能性�？乖Q可以通過直接在表中編輯文本來定制。

請注意，即使工具有所指示，也可能無法獲得每個潛在的zui小交叉反應性排列。山羊和驢子通常是J佳的二抗體宿主物種選擇，因為它們具有zui小的交叉反應性。

標記來自同一宿主物種的初抗體

親和純化二抗體的單價Fab片段可覆蓋（阻斷）免疫球蛋白的表面，用于同一宿主物種的雙重標記一抗體，或阻斷組織切片或細胞表面的內源性免疫球蛋白。它們可以用于這些目的，因為Fab片段只有一個抗原結合位點（即它們是單價的）。

標記與樣本來自同一物種的初抗體

有時可能需要使用與樣本來自同一物種的初抗體，例如鼠對鼠。在這些情況下，二抗體也可能檢測到內源性免疫球蛋白，導致不必要的背景。這可以通過Fab片段阻斷來避免。

進一步考慮

出于一般阻斷目的，來自與二抗體宿主相同物種的正常血清（5%v/v）為非特異性、保守序列和/或Fc受體結合提供了有效的背景降低。

二抗體的單價Fab片段可以阻斷抗體的特定不良反應。這種阻斷適用于標本和初抗體屬于同一物種的情況（例如，小鼠貼上標簽），或在同一宿主動物中產生多個初抗體的情況。

可視化

成功的多重標記取決于探頭的使用，探頭的信號可以通過可用設備區(qū)分。

熒光顯微鏡是多重標記的通用平臺，因為濾波器組被設計用于區(qū)分可用的多種熒光團。窄帶通發(fā)射濾波器對于從多個熒光團中分離信號、抑制重疊光譜中的熒光檢測至關重要。當計劃多重標記協(xié)議時，用熒光團配制染料面板，其發(fā)射光譜分離良好，與可用儀器兼容。

Jackson ImmunoResearch注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務于大學科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml