3 種檢測(cè)方法可用于蛋白質(zhì)印跡：比色法、化學(xué)發(fā)光法和熒光法。每種檢測(cè)方法在靈敏度、定量、每次檢測(cè)成本或多重檢測(cè)方面都具有優(yōu)勢(shì)。

蛋白質(zhì)印跡是種用于從生物樣品或溶液中鑒定特定蛋白質(zhì)的分析技術(shù)。線性化的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠電泳分離以按大小分辨它們，然后轉(zhuǎn)移到固定蛋白質(zhì)的膜上，例如硝酸纖維素或聚偏二氟乙烯( PVDF)。用針對(duì)特定目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗探測(cè)膜。然后使用與報(bào)告分子偶聯(lián)的二抗來(lái)識(shí)別抗并產(chǎn)生所需的信號(hào)。

Jackson公司：比色檢測(cè)

堿性磷酸酶 (AP) 和辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 偶聯(lián)物可用于比色檢測(cè)（圖 1(A)）。偶聯(lián)的報(bào)告酶催化顯色底物轉(zhuǎn)化為有色沉淀物，直接在印跡膜上顯現(xiàn)。比色檢測(cè)可以提供快速且容易獲得的結(jié)果，而無(wú)需昂貴的檢測(cè)器或廣泛的優(yōu)化。

Jackson公司：化學(xué)發(fā)光檢測(cè)

酶聯(lián)偶聯(lián)物也可用于化學(xué)發(fā)光信號(hào)檢測(cè)（圖 1(B)）。HRP 偶聯(lián)物通過(guò)將化學(xué)發(fā)光底物 (魯米諾) 氧化為發(fā)光形式來(lái)產(chǎn)生信號(hào)。

當(dāng)酶將特定底物（例如 1,2-二氧雜環(huán)丁烷）去磷酸化為發(fā)光產(chǎn)物時(shí)，AP 結(jié)合物會(huì)產(chǎn)生信號(hào)。

然后可以通過(guò)將膠卷暴露在膜上或使用冷卻的電荷耦合器件 (CCD) 相機(jī)來(lái)捕獲信號(hào)。化學(xué)發(fā)光檢測(cè)具有出色的靈敏度，但對(duì)多個(gè)目標(biāo)的定量和探測(cè)可能會(huì)受到限制，開(kāi)發(fā)可能需要改進(jìn)以?xún)?yōu)化信號(hào)捕獲。

Jackson公司：熒光檢測(cè)

熒光信號(hào)檢測(cè)使用熒光染料偶聯(lián)物來(lái)顯示膜上的抗原（圖 1 (C)）。特定于染料光譜特性的波長(zhǎng)的光用于激發(fā)熒光染料。吸收的光將染料的電子激發(fā)到更高的電子狀態(tài)，當(dāng)它們返回基態(tài)時(shí)，它們會(huì)以熒光團(tuán)的發(fā)射波長(zhǎng)特征發(fā)射光子。光線由配備適當(dāng)濾光片的數(shù)字成像儀檢測(cè)。熒光蛋白質(zhì)印跡允許定量分析和多重探測(cè)，而無(wú)需剝離和重新印跡。

備注：

圖 1：Western 印跡的 3 種檢測(cè)方法：(A) 比色法、(B) 化學(xué)發(fā)光法和 (C) 熒光法；A. 報(bào)道酶偶聯(lián)物催化顯色底物轉(zhuǎn)化為有色不溶性沉淀物，在印跡膜上肉眼可見(jiàn)。B. 報(bào)道酶偶聯(lián)物催化化學(xué)發(fā)光底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光形式的反應(yīng)，發(fā)射的光通過(guò)X射線膠片或CCD相機(jī)檢測(cè)。C. 報(bào)告熒光染料被其特征波長(zhǎng)的光激發(fā)，產(chǎn)生的發(fā)射光被數(shù)字成像儀捕獲。

表 1：檢測(cè)方法的特點(diǎn)——優(yōu)缺點(diǎn)

參考文獻(xiàn)：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml