顯色底物用于比色檢測(cè)。它們簡(jiǎn)單易用。適用于大多數(shù)免疫技術(shù)——從免疫組織化學(xué)到蛋白質(zhì)印跡和 ELISA，它們提供了種J具成本效益的檢測(cè)方法。

這期的主題是Jackson ImmunoResearch公司為大家講解：Western Blot、IHC 和 ELISA 的顯色檢測(cè)。

顯色底物可用于許多免疫組織化學(xué)應(yīng)用，從 IHC 染色組織到蛋白質(zhì)印跡。將顯色底物添加到先與酶偶聯(lián)抗體（通常是辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 或堿性磷酸酶 (AP)）孵育的印跡或組織中，將底物轉(zhuǎn)化為有色沉淀物。通過(guò)簡(jiǎn)單地洗掉基板來(lái)阻止信號(hào)發(fā)展。沉淀物肉眼可見(jiàn)，在蛋白質(zhì)印跡上，無(wú)需特殊設(shè)備即可檢測(cè)為彩色條帶。用于免疫組化 (IHC) 時(shí)，在正常光學(xué)顯微鏡下可以在組織上看到顯色沉淀。

圖 1：間接比色檢測(cè)。A. 報(bào)告酶偶聯(lián)二抗可檢測(cè)目的蛋白的抗。B. 將顯色底物添加到抗體-抗原復(fù)合物中。C. 報(bào)道酶偶聯(lián)物催化顯色底物轉(zhuǎn)化為有色不溶性沉淀物，在印跡膜上肉眼可見(jiàn)。

、Jackson：溶解度

顯色試劑可用于不同的報(bào)告酶、HRP、AP、GOD（葡萄糖氧化酶）和 β-Gal（β 半乳糖苷酶）�；挠胁煌念伾挽`敏度。根據(jù)測(cè)定，可以選擇可溶性或不溶性底物。

不溶于醇的色原適用于使用復(fù)染劑或封固劑的蛋白質(zhì)印跡和 IHC。可溶性染料更適合 ELISA 和基于板的測(cè)定。

二、Jackson公司：Western印跡和斑點(diǎn)印跡

當(dāng)用于蛋白質(zhì)印跡或斑點(diǎn)印跡時(shí)，顯色底物在膜上固定抗原抗體復(fù)合物的位置顯示為彩色條帶或斑點(diǎn)（圖 2 和 3）。印跡可以顯影，直到條帶的信號(hào)達(dá)到所需的強(qiáng)度，這允許良好的靈敏度水平，因?yàn)榭梢灾苯佑^察印跡的發(fā)展，并且通過(guò)洗去底物立即停止反應(yīng)。然后可以對(duì)顯影的膜進(jìn)行成像或存儲(chǔ)以供后續(xù)使用。樣品濃度低（低抗原）的樣品可能需要延長(zhǎng)顯影時(shí)間，這可能導(dǎo)致背景較高、條帶模糊。

三、Jackson公司：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

比色 ELISA 測(cè)量可溶性有色產(chǎn)品的光密度，該光密度通常與樣品中存在的分析物的量成正比，從而可以對(duì)分析物進(jìn)行相對(duì)定量。與其他免疫技術(shù)樣，ELISA 需要優(yōu)化時(shí)間和開(kāi)發(fā)條件，以獲得準(zhǔn)確且可重復(fù)的測(cè)定。（圖4）

四、Jackson公司：免疫組織化學(xué)

比色檢測(cè)對(duì)于組織和細(xì)胞的免疫染色來(lái)說(shuō)是種非常靈敏的方法。不同的底物提供不同的靈敏度和顏色以幫助識(shí)別，多種抗原識(shí)別是可能的，因?yàn)轭伾梢耘c種底物和另種底物區(qū)分開(kāi)來(lái)。有許多復(fù)染劑可用，可用于增加對(duì)比度，使 IHC 染色看起來(lái)更強(qiáng)。圖 5 顯示了3,3＇ 二氨基聯(lián)苯胺（ DAB 染色）與細(xì)胞核的蘇木精復(fù)染的棕色。

五、Jackson公司：報(bào)告酶（與抗體偶聯(lián)）

J常見(jiàn)的偶聯(lián)報(bào)告酶是來(lái)自辣根植物Armoracia rusticana的辣根過(guò)氧化物酶 (HRP)和來(lái)自小牛腸的堿性磷酸酶 (AP)，盡管來(lái)自大腸桿菌的葡萄糖氧化酶 (GOD) 和 ß-D-半乳糖苷酶也可以使用。HRP 和 AP 都根據(jù)應(yīng)用要求提供不同的優(yōu)勢(shì)。HRP 是種 40 kDa 的小分子，通常以 4:1 的比例與抗體結(jié)合。它的小尺寸意味著良好的細(xì)胞內(nèi)滲透性，并且不太可能引起抗原/抗體復(fù)合物的空間位阻。AP 稍大（86 kDa），可能會(huì)導(dǎo)致空間干擾，但底物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是線(xiàn)性的，這可能意味著檢測(cè)孵育時(shí)間可以延長(zhǎng)，并且可能更敏感。AP 還消除了對(duì)具有高水平內(nèi)源性過(guò)氧化物酶（HRP 中的個(gè)限制因素）的組織進(jìn)行非特異性染色的可能性。

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml