、Jackson公司選擇合適的封閉試劑：

蛋白封閉劑

封閉溶液的蛋白質(zhì)成分應(yīng)與被檢測(cè)的抗原和二抗的種類相容。

牛血清白蛋白 (BSA) 和脫脂奶粉通常用于封閉溶液，因?yàn)樗鼈兗缺阋擞秩菀撰@得。然而，它們并不總是合適的，并且可能是背景的原因。

當(dāng)使用針對(duì)來(lái)自牛或相關(guān)物種（如羊駝、山羊、馬或綿羊）的抗體的抗體時(shí)，應(yīng)避免使用 BSA 和脫脂奶粉。在許多 BSA 制劑中發(fā)現(xiàn)低水平的牛免疫球蛋白 G (IgG)。

建議使用來(lái)自標(biāo)記二抗宿主物種的正常血清作為佳封閉劑，以避免任何不必要的相互作用。使用應(yīng)制備新鮮的血清工作溶液，通常在浸入膜之在所選緩沖液中稀釋至 5% w/v。

緩沖溶液

通常使用 pH 范圍高于大多數(shù)抗體（pH 范圍 7.5-8.5）的等電點(diǎn) (pI) 的緩沖溶液，例如 Tris 緩沖鹽水 (TBS) 或磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)。如果磷酸化蛋白是印跡的焦點(diǎn)，則不推薦使用 PBS。

這是因?yàn)榭箍梢耘c緩沖液中的磷酸鹽以及靶蛋白結(jié)合。還應(yīng)考慮緩沖液 pH 值對(duì)檢測(cè)步驟中使用的報(bào)告酶（例如堿性磷酸酶）活性的影響。

非離子洗滌劑

非離子去污劑通常包含在蛋白質(zhì)印跡中使用的緩沖液中。它們可以防止聚集，這本身會(huì)導(dǎo)致背景，但也可以綁定到可能導(dǎo)致非特定交互的任何站點(diǎn)。

Tween-20™（通常為 0.1%）通常用作緩沖添加劑。

二、Jackson公司孵化時(shí)間和洗滌

應(yīng)確定實(shí)現(xiàn)佳信噪比所需的短可能阻塞持續(xù)時(shí)間。雖然在 4°C 下過(guò)夜封閉可能很有吸引力，但過(guò)度封閉孵育會(huì)導(dǎo)致聚集和細(xì)菌生長(zhǎng)，這可能會(huì)導(dǎo)致背景或干擾可視化。

封閉過(guò)程可能需要通過(guò)改變組分及其濃度、時(shí)間和溫度來(lái)進(jìn)行優(yōu)化，以獲得低的背景和高的信噪比。

值得注意的是，在封閉后用不含其蛋白質(zhì)成分的緩沖液清洗膜很重要，因?yàn)樗梢愿纳瓶箤?duì)抗原表位的訪問(wèn)。（表1）

注意：有的阻塞解決方案 

有幾種預(yù)配制的封閉溶液可供使用，它們?cè)谑袌?chǎng)上銷售時(shí)適用于所有實(shí)驗(yàn)條件。情況可能并非總是如此，盡管它們可能足以滿足組條件。重要的是要考慮后續(xù)試劑的種類可能會(huì)排除使用通用封閉溶液，并且使用標(biāo)記抗體種類的正常血清可能更可靠。

注意：用 BSA 或牛奶封閉

牛血清白蛋白 (BSA) 和奶粉可能含有牛 IgG�？寡蝰�、抗牛、抗山羊、抗馬和抗羊抗體會(huì)與牛 IgG 發(fā)生反應(yīng)。使用 BSA 或奶粉進(jìn)行封閉或稀釋可能會(huì)顯著增加背景和/或降低抗體滴度，應(yīng)避免使用具有這些特異性的抗體；使用標(biāo)記二抗宿主物種的正常血清 (5% v/v)。如果 BSA 被視為封閉劑，請(qǐng)使用不含 IgG 的試劑以降低背景電位。（表2）

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml