在這項研究中，作者產(chǎn)生了種針對 SAP-1（克隆 123）的單克隆抗體 (mAb)，然后使用二次免疫熒光和 艾美捷 Nanoprobes Nanogold 標記來研究這種蛋白質(zhì)在小鼠胃腸道內(nèi)的分布。

分辨率優(yōu)勢：

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab＇ 與常規(guī) 5 nm 膠體金-IgG 探針的尺寸比較，顯示了整體探針尺寸和金與目標的距離。由于其位于鉸鏈區(qū)，Nanogold 在結(jié)合時更靠近目標，但不會阻礙或干擾結(jié)合。此外，其較小的尺寸允許更密集的標記，并有助于滲透到組織中并獲得受阻抗原。

用這種 mAb 進行的免疫印跡分析揭示了大約 250-kDa SAP-1 蛋白在腸道中的顯著表達，以及在睪丸中的低水平表達。十二指腸或空腸中的SAP-1含量明顯高于胃或結(jié)腸。對 SAP-1 的 mAb 的免疫組織熒光顯示 SAP-1 定位于腸上皮細胞的頂端表面，類似于埃茲蛋白或堿性磷酸酶，已知這兩種酶都定位于腸上皮的微絨毛。在鬼筆環(huán)肽顯示的 F-肌動蛋白顯著染色上方立即檢測到 SAP-1 免疫反應(yīng)性，這可能對應(yīng)于腸上皮細胞刷狀緣處的末端網(wǎng)。

對于免疫電子顯微鏡研究，通過腹膜內(nèi) (ip) 注射 25 mg/kg 重量的戊巴比妥鈉對小鼠進行麻醉，然后在 0.1 M 二甲胂酸鈉緩沖液 (pH 7.4) 中經(jīng)心灌注 2% PFA 和 2.5% 戊二醛。取出組織并在相同的固定劑中在 4°C 下浸泡 1 小時，然后在 4°C 下與相同緩沖液中的1% OsO 4起孵育 1 小時。然后將它們脫水并嵌入 Epon。對于免疫 EM，組織樣品在室溫下通過在含有 4% 多聚甲醛 (PFA) 和 1% 戊二醛的磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS) 中浸泡 2 小時進行固定。使用 mAb 對小鼠 SAP-1 和Nanogold 標記的 Fab＇ 山羊抗大鼠 IgG制備和處理 10 µm 厚的冷凍切片進行免疫染色. 使用HQ Silver Enhancement 套件增強信號。銀增強完成后，切片再次用1% OsO 4和0.1% 亞鐵qing化鉀固定，后包埋在Epon中。然后制備超薄切片（90 nm），用乙酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色，并用 JEM 1010 電子顯微鏡（JEOL）檢查。

標記模式分析證實SAP-1蛋白定位于胃腸上皮細胞刷狀緣微絨毛；小鼠 SAP-1 mRNA 主要局限于胃腸道。其他實驗發(fā)現(xiàn)，SAP-1 在小鼠腸道中的表達在胚胎發(fā)育期間小，但在出生后顯著增加，與腸上皮細胞的分化致。SAP-1缺陷小鼠的腸上皮形態(tài)沒有明顯變化。然而，SAP-1 消融抑制了腺瘤性結(jié)腸息肉基因雜合突變小鼠的腫瘤發(fā)生，導(dǎo)致大腺瘤（> 2 mm）減少。這些結(jié)果表明 SAP-1 是種微絨毛特異性 RPTP，可調(diào)節(jié)腸道腫瘤發(fā)生。

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab＇ 參考文獻：

Sadakata, H.; Okazawa, H.; Sato, T.; Supriatna, Y.; Ohnishi, H.; Kusakari, S.; Murata, Y.; Ito, T.; Nishiyama, U.; Minegishi, T.; Harada, A., ａnd Matozaki, T.: SAP-1 is a microvillus-specific protein tyrosine phosphatase that modulates intestinal tumorigenesis. Genes Cells, 14, 295-308 (2009).

Abstract (courtesy of Wiley Interscience).

Nanoprobes注于免疫金標記和免疫測定試驗域，為廣大科研機構(gòu)提供用于檢測生物分子的靈敏的試劑和技術(shù)。艾美捷科技是Nanoprobes的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml