右圖：用 6x-His 標(biāo)簽克隆的來自腺病毒的旋鈕蛋白，用 Ni-NTA-Nanogold 標(biāo)記，從過量金中純化的柱子，在掃描透射電子顯微鏡 (STEM) 中觀察，未染色（全寬約 245 nm）。左圖：Ni-NTA-Nanogold 的結(jié)構(gòu)，顯示了摻入的金屬螯合物與 His 標(biāo)簽蛋白的結(jié)合。插圖顯示了分辨率，表示為從 Nanogold 粒子中心到 His 標(biāo)簽的距離：請注意，這明顯短于抗體的等效距離。

這些特性使 HQ Silver 成為電子顯微鏡的理想選擇，但由于天然增稠劑的存在，與其他些銀增強(qiáng)試劑相比，這些成分更容易受到微生物污染，而且它們的粘性意味著可能需要使用更多小心使用該試劑。

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold™ 與傳統(tǒng)抗體探針相比具有幾個顯著優(yōu)勢：

1.更好的滲透性：由于它非常小，NTA-Ni(II)-Nanogold 可以更容易地滲透到樣品中并進(jìn)入樣品內(nèi)的空間受限位點，并且對其超微結(jié)構(gòu)的干擾更少。在某些系統(tǒng)中，它可以用于更強(qiáng)的固定或更少的透化，從而使標(biāo)記具有更好的超微結(jié)構(gòu)保存。

2.更高的標(biāo)記分辨率。次氮基三乙酸 - Ni(II) 螯合物比抗體或蛋白質(zhì)小得多，因此當(dāng)它結(jié)合時，金更接近其目標(biāo)。這使得 NTA-Ni(II)-Nanogold 非常適合以分子分辨率定位蛋白質(zhì)復(fù)合物或其他大分子組裝體中的位點。

3.NTA-Ni(II)-Nanogold 是使用改性金顆粒制備的，具有非常高的溶解度和穩(wěn)定性。它的大小為 1.8 nm，很容易通過電子顯微鏡觀察到。

新的 15nm 版本在 EM 下直接可見，無需金或銀顯影。

4.Ni(II)-NTA 的結(jié)合常數(shù)非常高，這是由于多個組氨酸結(jié)合的螯合效應(yīng)和多個 Ni(II)-NTA 功能化的靶結(jié)合的結(jié)合。解離常數(shù)估計在10 -7到10 -13 M -1之間。對于許多應(yīng)用，這提供了與抗體相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合強(qiáng)度。

應(yīng)用包括：

對含有重組 His 標(biāo)簽蛋白的蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)復(fù)合物或細(xì)胞器進(jìn)行高分辨率標(biāo)記，用于 EM1 或 STEM2 定位。

光系統(tǒng) II 的兩個不同亞基的標(biāo)記和分子定位。

組織切片中帶His標(biāo)簽的蛋白質(zhì)的“通用”預(yù)嵌入標(biāo)記，用于電子顯微鏡觀察。

在 Ni-NTA 柱純化過程中識別餾分中的 His 標(biāo)簽蛋白。

檢測印跡和凝膠中的重組 His 標(biāo)簽蛋白。

用于圖像分析和結(jié)構(gòu)求解的規(guī)則結(jié)構(gòu)的重原子標(biāo)記。

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold®已在低溫電子顯微鏡中得到廣泛應(yīng)用。個例子，近篇關(guān)于革蘭氏陰性菌多糖輸出系統(tǒng)的綜述，是Wzc 中結(jié)構(gòu)域的定位，Wzc是種酪氨酸自激酶，在多糖的協(xié)調(diào)生物合成和分泌過程中起核心作用，構(gòu)成保護(hù)膜的多糖。包封的大腸桿菌來自宿主免疫防御的細(xì)菌。莢膜由 K 抗原莢膜多糖形成：其組裝和易位需要內(nèi)膜和外膜中的蛋白質(zhì)，而內(nèi)膜蛋白 Wzc 起著關(guān)鍵作用：缺乏 Wzc 的突變體無法聚合高分子量的莢膜聚合物。Wzc 的同源物已在許多不同革蘭氏陰性和陽性細(xì)菌的外聚合物生物合成系統(tǒng)中被鑒定出來，因此這種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能具有相當(dāng)大的意義。

艾美捷 Nanoprobes NTA-Ni(II)-Nanogold用于用N標(biāo)記 Wzc-終端His標(biāo)簽（His6-Wzc）；Nanogold 標(biāo)記既可用作重原子衍生物以幫助定相，也可用作高分辨率標(biāo)記以確定膜內(nèi)復(fù)合物的方向。比較使用和不使用 Nanogold 標(biāo)記獲得的分子包膜表明，用 NTA-Ni(II)-Nanogold 孵育的 Wzc 顆粒與沒有 Nanogold 的顆�；鞠嗤�，但很容易觀察到多種金密度與蛋白質(zhì)結(jié)合。使用較小的金標(biāo)記數(shù)據(jù)集，生成了分辨率約為 22 Å 的第二個三維結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)顯示體積內(nèi)包含額外的結(jié)合金密度。在兩個位置發(fā)現(xiàn)了納米金：在根部區(qū)域的上半部分，以及由牙冠下方的根部形成的空腔底部。第二個位置與蛋白質(zhì)包膜沒有物理連接，因此可能代表非特異性結(jié)合或捕獲的金顆粒。然而，Nanogold 在任位置的存在表明根部含有N端，因此在細(xì)胞質(zhì)中，而冠在周質(zhì)中。

Nanoprobes注于免疫金標(biāo)記和免疫測定試驗域，為廣大科研機(jī)構(gòu)提供用于檢測生物分子的靈敏的試劑和技術(shù)。艾美捷科技是Nanoprobes的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml