產(chǎn)品展示
Worthington酸性磷酸酶的特征和測定(附文獻)
點擊次數(shù):0發(fā)布時間:2022/7/26 17:07:00
更新日期:2022/7/26 17:07:00
所 在 地:中國大陸
產(chǎn)品型號:
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細內(nèi)容
酸性磷酸酶在自然界中無處不在,也許集中的來源之是人類列腺,臨床化學(xué)家利用這事實測量血清酶水平作為列腺癌的指標。它還與戈謝病有關(guān),患者在其電泳血清中表現(xiàn)出獨特的峰(Goldberg等人1966)。酸性磷酸酶已由 Hollander (1971) 進行了綜述,但不包括小麥胚芽酶。
Teller 于 1954 年在 Singer 于 1948 年描述的小麥胚芽脂肪酶制劑中觀察到酸性磷酸酶活性。隨后的工作證實,小麥胚芽制劑的非特異性酯酶活性可以用脂肪酶(作為底物的示蹤素)和磷酸酶來測量.
該酶已被至少三個不同的實驗室純化并描述了其特性。Joyce 和 Grisolia (1960) 將其純化了大約 3000 倍,并測量了它對各種磷酸酯的活性。Brouillard 和 Ouellet (1965) 通過離子交換獲得了四種不同形式的酶,并提供了分子中存在三價鐵的證據(jù)。Verjee (1969) 獲得了三個活性峰,并表明它們具有各自的特性。
艾美捷 Worthington小麥胚芽酸性磷酸酶的特性:
分子量:55,000 ± 5,000 (Verjee 1969)。
組成: Verjee (1969) 報道了三種分子量非常相似的同工酶:EI、EII 和 EIII。另見 Brouillard 和 Ouellet (1965)。
佳 pH 值:EI - 5.5、EII - 4.5 和 EIII - 4.0。(維吉 1969 年)。
特異性:該酶具有廣泛的酯酶活性。參見喬伊斯和格里索利亞 (1960)。它顯示出對焦磷酸的高活性。
抑制劑:氟化物、鉬酸鹽和正磷酸鹽(Verjee 1969)。
艾美捷 Worthington小麥胚芽酸性磷酸酶的測定:
方法:基于 Brandenberger 和 Hanson (1953) 和 Hofstee (1954) 的工作。磷酸鄰羧基苯酯的初始水解速率是根據(jù)水楊酸釋放引起的 300 nm 處吸光度的增加來確定的。在指定條件下,個單元在 25°C、pH 5.0 下每分鐘水解 1 微摩爾鄰羧基苯基磷酸酯。(在上述條件下使用對硝基苯基磷酸酯底物獲得了等效的比活性)。
試劑:
0.15 M 醋酸鈉緩沖液,pH 5.0
3.65 mM 鄰羧基苯基磷酸酯
酶:
以 1.0 mg/ml 的濃度溶解在試劑水中。
程序:
將分光光度計調(diào)整到 300 nm 和 25°C。
將移液器移入每個比色皿,如下所示:
0.15 M 醋酸鹽緩沖液,pH 5.0 2.0毫升
3.65 mM 鄰羧基苯基磷酸酯 0.5 毫升
在分光光度計中孵育 3-4 分鐘以達到溫度平衡并確定空白率(如果有)。添加 0.5 ml 酶并在 A 300中記錄增加 4-5 分鐘。從曲線的初始線性部分計算 ΔA 300 /分鐘。
計算:
Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。