該試劑盒是與 Ronal MacGregor 博士合作制定的。該方法基于 Toraason 等人描述的方法。Toxicol, 56 , 107 (1988)，其中將切碎的組織與純化的胰蛋白酶在 2-8°C 下孵育過(guò)夜。正如 Toraason 所指出的，與在溫胰蛋白酶或膠原酶中連續(xù)孵育所涉及的時(shí)間相比，此步驟減少了收獲細(xì)胞所需的手動(dòng)操作時(shí)間。使用純化的膠原酶而不是粗膠原酶來(lái)大化產(chǎn)量和活力。

艾美捷 Worthington新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng)內(nèi)容：

該包裝包含足夠的材料，可用于五個(gè)單獨(dú)的組織解離，每個(gè)包含多達(dá) 12 個(gè)心臟。對(duì)于較大或較小的組織樣本，在每個(gè)步驟中準(zhǔn)備相應(yīng)體積的試劑，并按照協(xié)議中所述的相同比例將它們組合起來(lái)。

• 小瓶 1 : 1 瓶，500 毫升：無(wú)菌不含鈣和鎂的漢克平衡鹽溶液 (CMF HBSS)，pH 7.4。除了用作解離的介質(zhì)外，該溶液還用于重構(gòu)小瓶 #2 和 #3 的內(nèi)容物。

• 小瓶 2：5 小瓶，每瓶 1000 µg：Worthington 胰蛋白酶（代碼：TRLS），3X 結(jié)晶，用 1mM HCl 透析，通過(guò) 0.22 微米孔徑的膜過(guò)濾，并凍干。使用，用 2ml CMF HBSS（1 號(hào)小瓶）復(fù)溶并輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。儲(chǔ)存在 2-8°C。

• 小瓶 3： 5 小瓶，每瓶 2000 µg：Worthington 大豆胰蛋白酶抑制劑（代碼：SIC），種 0.22 微米孔徑的膜過(guò)濾凍干粉末。使用，用 1ml CMF HBSS（1 號(hào)小瓶）復(fù)溶并輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。儲(chǔ)存在 2-8°C。

• 小瓶 4：5 小瓶，每個(gè) 1500 單位：Worthington 純化膠原酶（代碼：CLSPA），種 0.22 微米孔徑膜過(guò)濾的凍干粉末，經(jīng)過(guò)色譜純化。它每毫克含有少于 50 個(gè)酪蛋白酶單位，由兩種可分離但非常相似的膠原酶組成。使用，用 5ml Leibovitz L-15 培養(yǎng)基（如下所述制備）復(fù)溶并輕輕旋轉(zhuǎn)以溶解內(nèi)容物。儲(chǔ)存在 2-8°C。

• 裝有 Leibovitz L-15 培養(yǎng)基粉末的袋子：1 x 1L，通過(guò)切開(kāi)信封頂部并將內(nèi)容物倒入裝有 800 毫升細(xì)胞培養(yǎng)水的燒杯中來(lái)重構(gòu)袋子的全部?jī)?nèi)容物。用額外的 100 毫升沖洗袋子 2-3 次。使總體積達(dá)到 1 升并通過(guò) 0.22 微米孔徑的過(guò)濾器過(guò)濾。

該試劑盒還包括 5 個(gè)細(xì)胞過(guò)濾器 (Falcon)，這是張將酚紅顏色與 pH 值相關(guān)聯(lián)的卡片，用于檢查平衡鹽溶液和培養(yǎng)基。

艾美捷 Worthington新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng)參考文獻(xiàn)：

1.Engelmann, G., McTiernan, C., Gerrity, R., Samarel, A.： 技術(shù) 2 , 279, 1990

3.Fratalli, V. 和 Steiner, R.： 大豆抑制劑。、從商品粗制大豆胰蛋白酶抑制劑中分離出三種抑制劑及其些性質(zhì) ， 生物化學(xué) 7 , 521, 1968

4.Freshney, R. Ian： 《動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)手冊(cè)》，第 4 版。,, Wiley-Liss, Inc., 紐約, , 2000

5.Gross, W.、Schopf-Ebner, E. 和 Bucher, O.： 分離心肌細(xì)胞均質(zhì)培養(yǎng)物的制備技術(shù) ， Exp Cell Res 53 , 1, 1968

Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml