自 2006 年推出以來，Transcreener 激酶檢測試劑盒已在數(shù)百萬個孔中用于 HTS 和先導(dǎo)發(fā)現(xiàn)。

BellBrook 艾美捷Transcreener 檢測試劑盒案例展示：

1、使用 Transcreener 激酶檢測試劑盒發(fā)現(xiàn) IRAK4 抑制劑

Genentech 使用 Transcreener Kinase Assay Kit 發(fā)現(xiàn) IRAK4 抑制劑——IRAK也稱為 Interluekin-1 Receptor Associated Kinase。該組中有四種不同的蛋白質(zhì)，包括 IRAK1、IRAK2、IRAK3 和 IRAK4。這些中的每個都介導(dǎo)與 MyD88 及其相關(guān)銜接蛋白的相互作用。IRAK1 和 IRAK4 是具有激酶活性的活性酶，而 IRAK3 通常被認(rèn)為是無活性的。IRAK2 曾被認(rèn)為是無活性的，但研究表明其激酶活性對 TLR 信號傳導(dǎo)至關(guān)重要。

由于上游 toll 樣受體激活 IRAK4，它使 IRAK1 磷酸化。IRAK1 然后通過其激酶活性自磷酸化并激活下游底物。該聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致 MAPK 和 NF-κB 的激活以及促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。2進(jìn)步的研究支持將 IRAK4 作為先天免疫靶點。在這些研究中，IRAK1 基因敲除小鼠在遭受“實驗性自身免疫性腦脊髓炎”時幾乎沒有或沒有炎癥。3還發(fā)現(xiàn)具有 IRAK4 突變的患者存在促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子產(chǎn)生的問題。

調(diào)節(jié) IRAK4 的化合物為小分子藥物治療炎癥和免疫疾病提供了潛在途徑。與 IRAK4 相關(guān)的些疾病包括癌癥、狼瘡、炎癥性腸病、關(guān)節(jié)炎和糖尿病。

在藥物發(fā)現(xiàn)中使用激酶檢測試劑盒

在近發(fā)布的zhuanli中，Genentech討論了它如何使用Transcreener Kinase Assay Kit 來測量酶活性并確定各種化合物的 Ki 值�？傊�，使用合成的 IRAK1 肽作為底物測試了 IRAK4 測定條件。將樣品孵育 90 分鐘，達(dá)到目標(biāo) 10% 的 ATP 轉(zhuǎn)化為 ADP。該測定的敏感性使研究人員能夠使用低 nM 濃度的 IRAK4 (1.25 nM)。還使用先討論的相同合成肽底物測量了 IRAK1 活性。還使用 10% 的轉(zhuǎn)化率，起始 ATP 濃度為 62.5 uM。然后在 Tecan M1000 讀板機上讀取化驗結(jié)果，隨后分析數(shù)據(jù)。舉例說明了納摩爾抑制劑的例子。

使用激酶測定試劑盒測量酶活性對于在高通量篩選過程中尋找新的抑制劑至關(guān)重要。檢測必須足夠穩(wěn)健，可以在大屏幕上處理數(shù)小時，但又必須足夠準(zhǔn)確，以提供可靠、可重復(fù)的數(shù)據(jù)和良好的靈敏度。正如基因泰克所說明的那樣，后續(xù)的 SAR 對于構(gòu)建正確的化合物集以在臨床上進(jìn)行治療至關(guān)重要。像 Transcreener 這樣的生化激酶檢測試劑盒是發(fā)現(xiàn)新抑制劑并將其固化為先導(dǎo)化合物的關(guān)鍵組件。IRAK4 是個引人注目的先天免疫靶點，看看臨床試驗如何發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的潛在治療方法將會很有趣。

2、研究人員使用 Transcreener ATPase Assay 驗證 Hsp70 活性

正在研究新表達(dá)的人類 Hsp70 活性——熱休克蛋白 70 (Hsp70) 以在壓力期間上調(diào)以維持體內(nèi)平衡而聞名。與其他熱休克蛋白樣，Hsp70 是種伴侶蛋白，可幫助其他蛋白質(zhì)正確折疊成為完全活躍的分子。它與受損、錯誤折疊或部分折疊的蛋白質(zhì)結(jié)合，使它們無助，直到時機成熟；在其調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)折疊的作用的情況下，壓力已經(jīng)過去或形成完全合成的蛋白質(zhì)。但是，這還不是全部。除了保護細(xì)胞和保持其他蛋白質(zhì)的完整性外，Hsp70 通過阻斷 procaspase-9 向凋亡復(fù)合體的募集來抑制細(xì)胞凋亡。通常，這些細(xì)胞存活機制是保持我們健康所必需的。然而，由于同樣重要的細(xì)胞功能，熱休克蛋白會導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病和癌癥。

Hsp70 ATP酶活性

Hsp70 具有三個結(jié)構(gòu)域。在其自然狀態(tài)下，它與 ATP 結(jié)合；然而，當(dāng)需要通過不允許錯誤折疊的蛋白質(zhì)聚集來保護細(xì)胞時，它會釋放 ATP 并與 ADP 結(jié)合；ATP酶活性增加。當(dāng)與 cochaperone、熱休克蛋白 40 (Hsp40) 相互作用時，活性增加得更多。1,2,3 Hsp40 蛋白具有多肽結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (PPD)，能夠?qū)⒍喾N其他分子結(jié)合并遞送至 Hsp70。1在 ATP 釋放期間，Hsp70 上的構(gòu)象變化允許錯誤折疊的蛋白質(zhì)結(jié)合。同樣，旦 ADP 被釋放并且 ATP 再次結(jié)合，部分折疊的蛋白質(zhì)就能夠自由移動。

生產(chǎn)全長和活性人 Hsp70

由于我們目對 Hsp70 的了解來自大腸桿菌同源物，其共享約 50% 的氨基酸同性，Marcion 等人。很高興能創(chuàng)造出重組全長人類熱休克蛋白 70 (hHsp70)。2BellBrook 的 Transcreener® Assay技術(shù)使研究人員能夠在純化后確認(rèn)其功能。驗證功能非常重要。該蛋白質(zhì)必須具有活性才能進(jìn)步研究并可能找到種抑制劑來對抗過量 Hsp70 的負(fù)面影響。該測定表明，當(dāng)與人 Hsp40 結(jié)合時，Hsp70 活性增加，就像它在體內(nèi)樣。

對于那些有興趣研究 hHsp70 和尋找治療分子來幫助那些患有癌癥和/或神經(jīng)退行性疾病的人來說，這發(fā)現(xiàn)是令人振奮的消息。

以上就是兩個有關(guān)于BellBrook 艾美捷Transcreener 檢測試劑盒的成功案例。

BellBrook致力于蛋白質(zhì)靶標(biāo)的高通量篩選工具，助力制藥和生物技術(shù)公司、CRO 和學(xué)術(shù)實驗室加速藥物發(fā)現(xiàn)。Transcreener 高通量篩選 (HTS) 平臺，可以提供的直接檢測有：ADP2，AMP2/GMP2，GDP，UDP2等檢測。艾美捷科技是BellBrook的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/BellBrook-Labs.shtml