痛點(diǎn)：

其中些純化方法不是特異性的，因?yàn)樗鼈児餐兓饷隗w和其他細(xì)胞外囊泡。 這意味著當(dāng)涉及到外泌體內(nèi)容物的純化時(shí)，細(xì)胞外囊泡的內(nèi)容物也將被純化。

例如，如果外泌體沉淀中含有凋亡小體，則凋亡小體中所含的DNA也會(huì)隨著外泌體的RNA、microRNA和蛋白質(zhì)內(nèi)容物起被純化。這可能會(huì)誤導(dǎo)潛在的分析。

這些方法中的大多數(shù)都需要花費(fèi)大量的時(shí)間。

例如，基于polymer的方法需要過夜孵育期。

其中的些方法的低通量限制了樣本量，并終限制了外泌體的多樣性或產(chǎn)量。

其中的些方法需要在外泌體純化之進(jìn)行預(yù)處理，以及特殊的儀器。

Norgen用于外泌體純化的SiC技術(shù)：該純化技術(shù)通過調(diào)節(jié)樣品的pH值來改變外泌體表面蛋白的電荷，使其與碳化硅技術(shù)結(jié)合。Norgen外泌體純化試劑盒 操作快速、靈敏、特異，允許高通量，不需要特殊的儀器或預(yù)處理。

名稱及描述 貨號(hào) 上樣量范圍

Plasma/Serum Exosome Purification ａnd RNA Isolation Mini Kit 58300 50 ?L - 1 mL

Plasma/Serum Exosome Purification ａnd RNA Isolation Midi Kit 58500 1 mL - 4 mL

Plasma/Serum Exosome Purification ａnd RNA Isolation Maxi Kit 58600 4 mL - 10 mL

Urine Exosome Purification ａnd RNA Isolation Mini Kit 58400 250 ?L - 1 mL

Urine Exosome Purification ａnd RNA Isolation Midi Kit 58700 2 mL - 10 mL

Urine Exosome Purification ａnd RNA Isolation Maxi Kit 58800 11 mL - 30 mL

Cell Culture Media Exosome Purification ａnd RNA Isolation Mini Kit 60700 5 mL - 10 mL

Cell Culture Media Exosome Purification ａnd RNA Isolation Midi Kit 60800 10 mL - 20 mL

Cell Culture Media Exosome Purification ａnd RNA Isolation Maxi Kit 60900 20 mL - 35 mL

Saliva Exosome Purification Kit 65300 Up to 2 mL

Norgen外泌體純化試劑盒的方法原理：

1.將引入 ExoC buffer 來調(diào)整樣品的pH值，從而改變外泌體表面蛋白質(zhì)的電荷。

2.旦 SiC slurry E 被加入到樣品中，改性的表面蛋白將結(jié)合到 SiC 上并形成沉淀顆粒。

3.由于蛋白質(zhì)結(jié)合的 RNA 也會(huì)與 SiC 結(jié)合，下步將從SiC和蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA中分離外泌體。 ExoR buffer將被引入沉淀顆粒中，并再次修飾外泌體表面蛋白。

4.外泌體將從 SiC 中釋放出來，上清液中將包含純化的外泌體。

關(guān)于Norgen外泌體純化試劑盒的補(bǔ)充要點(diǎn)：

1.在純化外泌體和RNA方面沒有達(dá)到預(yù)期的產(chǎn)量。產(chǎn)量差異是很大；它取決于細(xì)胞的活性、健康狀況、年齡等。RNA產(chǎn)量般在1-100 pg/μL范圍內(nèi)。

2.Norgen試劑盒可以從新鮮或冷凍樣品中純化外泌體。但是，如果要使用冷凍樣品，不要去除樣品中形成的蛋白質(zhì)沉淀物這點(diǎn)很重要，因?yàn)樗鼤?huì)含有外泌體。

3.業(yè)文章鑒賞：Human myeloma cell- ａnd plasma-derived extracellular vesicles contribute to functional regulation of stromal cells. Proteomics. 2021 (這篇文章展示了正確的分析方法，并證明從Norgen試劑盒中純化的外泌體可用于蛋白質(zhì)印跡、質(zhì)譜、納米顆粒和電子顯微鏡檢查。)

來源：https://www.amyjet.com/featured/Norgen-RNA.shtml