MyBioSource  艾美捷 腸激酶活性檢測(cè)試劑盒－－利用含有腸激酶特異性識(shí)別序列且?guī)в?span style="font-family: Calibri;">AFP熒光標(biāo)記的多肽底物，在腸激酶的催化作用下，該多肽底物被裂解，并釋放AFC分子，繼而通過(guò)測(cè)量其在Ex/Em = 380/500 nm的熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè)腸激酶活性的目的。

AFC標(biāo)準(zhǔn)曲線（a）。用人腸肽酶檢測(cè)試劑盒（b）的靈敏度。按照試劑盒方案進(jìn)行分析。

MyBioSource 艾美捷該試劑盒化驗(yàn)程序：

1.AFC標(biāo)準(zhǔn)曲線：通過(guò)向90µl腸肽酶分析緩沖液中添加10µl 1 mM AFC標(biāo)準(zhǔn)溶液，將AFC標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至100µM（100 pmol/µl）。將0、2、4、6、8和10µl稀釋的100µM AFC標(biāo)準(zhǔn)加入96孔板中的系列孔中，以生成0、200、400、600、800和1000 pmol/孔的AFC標(biāo)準(zhǔn)。用腸肽酶分析緩沖液將終體積調(diào)節(jié)至100µl。

2.樣品制備：在96孔板的每個(gè)孔中加入1-50微升具有腸肽酶活性的樣品。將5-10µl腸肽酶（陽(yáng)性對(duì)照）添加到所需孔中。用腸肽酶分析緩沖液將陽(yáng)性對(duì)照和樣品孔的終體積調(diào)節(jié)至50µl。平行制備帶有50µl腸肽酶分析緩沖液的底物背景控制井和帶有樣品+腸肽酶分析緩沖液的樣品背景控制井。

3.反應(yīng)混合物：混合足夠多的試劑，以滿足要進(jìn)行的分析數(shù)量。對(duì)于每個(gè)孔（樣品、陽(yáng)性對(duì)照和背景對(duì)照），制備50µl混合物，其中包含：

                   Reaction Mix                        Background Control Mix

Enteropeptidase Assay Buffer 48 µl 50 µl

Enteropeptidase Substrate 2 µl －－-

4.測(cè)量：室溫下培養(yǎng)30-60分鐘，在Ex/Em=380/500 nm下測(cè)量熒光。

注：培養(yǎng)時(shí)間取決于樣品中的腸肽酶活性。建議在動(dòng)力學(xué)模式下測(cè)量熒光，并在線性范圍內(nèi)選擇兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)（T1和T2）來(lái)計(jì)算樣品的腸肽酶活性。AFC標(biāo)準(zhǔn)曲線可在終點(diǎn)模式下讀�。丛谂囵B(yǎng)時(shí)間結(jié)束時(shí)）。

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