彗星實驗（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實驗（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是種超靈敏的單細(xì)胞水平上檢測DNA損傷的技術(shù)，可以檢測到1.657×10-15中0.1個DNA的斷裂,甚至檢出自然光照射體外淋巴細(xì)胞1h后引起的DNA損傷。在電泳場下，損傷的細(xì)胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來，在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測量彗星尾巴來目測的，也可以使用圖像分析軟件來測量各種參數(shù)。

Cell Biolabs【彗星分析應(yīng)用域】：主要還是在細(xì)胞凋亡的研究，腫瘤/癌癥研究，毒理學(xué)研究，環(huán)境污染監(jiān)測，臨床診斷與治療監(jiān)測。

接下來，艾美捷 Cell Biolabs會給大家分享下彗星分析實驗（Comet assay）怎么做？

步：Cell Biolabs彗星分析試劑盒不可少（可根據(jù)實驗用量，選擇不同的規(guī)格：）

常用：Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)

高通量篩選：Comet Assay Kits, 96-Well（96孔玻片）

艾美捷 Cell Biolabs丨Comet Assay kit彗星分析試劑盒內(nèi)提供了彗星分析所需的所有必需試劑，包括裂解液、彗星分析低熔點凝膠、DNA熒光染料、彗星分析玻片以及其它試劑。

第二步：彗星分析電泳模式選擇：

電泳模式 檢測類型 電泳時間 說明

TBE電泳（中性電泳）——檢測單鏈和雙鏈DNA的斷裂——推薦10-15 mins——分析細(xì)胞凋亡的shou選方法，可使用尾巴長度而非尾矩進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

堿性電泳——檢測單鏈和雙鏈DNA的斷裂，AP位點損傷在內(nèi)的所有DNA 損傷——推薦15-30mins——靈敏度zui高！

 * 實驗過程中的各類緩沖液都需要4℃預(yù)冷。

關(guān)于電泳電壓：以上2種電泳模式，均推薦參考實驗室電泳槽兩J間的舉例，按照1V/cm的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置電壓。舉例，如果電泳槽兩J舉例是35cm，那么你需要使用35V的電壓來執(zhí)行電泳。

實驗環(huán)境：為避免紫外線對細(xì)胞樣品造成額外損害，請在弱光條件下進(jìn)行。

第三步：彗星分析的典型結(jié)果樣式

如上圖，左側(cè)是健康的Jurkat細(xì)胞（未處理）；右側(cè)是使用20 uM Eoside（依托泊苷）處理4小時的Jurkat細(xì)胞�！倦娪緱l件：堿性電泳，15mins】

第四步：彗星分析結(jié)果計算

通過測量細(xì)胞核遺傳物質(zhì)（“彗頭”）與產(chǎn)生的“尾巴”之間的位移，可以量化DNA損傷。 尾矩（Tail Moment）和尾巴DNA％（Tail DNA% ）是分析彗星分析結(jié)果的兩個常見的參數(shù)。 每個樣品至少應(yīng)分析50 -100個細(xì)胞�？紤]到遺傳物質(zhì)的遷移以及尾巴中DNA的相對數(shù)量，通常建議使用尾矩作為評估DNA損傷的指標(biāo)。

Cell Biolabs 配套彗星實驗結(jié)果分析軟件：

軟件名稱               說明

OpenComet 免費(fèi)；是Image J軟件的款彗星分析插件

CaspLab （CASP） 免費(fèi)；獨(dú)立軟件

Comet Assay IV 付費(fèi)軟件；可試用1周

艾美捷科技是Cell Biolabs的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的彗星分析試劑盒。