有的人，做了200多次磷酸化蛋白，出結(jié)果的只有60幾次，與理論致的只有40次不到。令人崩潰。。。

現(xiàn)實情況確實如此，內(nèi)源性目的蛋白本身在細胞裂解物中表達豐度不高，而其磷酸化修飾的蛋白含量就更低了！即使用高濃度抗體，延長曝光時間，依舊很難獲得理想的效果。大多數(shù)市售的WB封閉劑（如牛奶，血清，BSA）雖然可以滿足阻斷膜上的未反應(yīng)位點，減少檢測過程中非特異性抗體的數(shù)量，但它們并不是為了在印跡過程中保護磷蛋白抗原而設(shè)計的，本身含有磷酸化蛋白成分，因而并不能為磷酸化WB雪中送炭！

接下來就說下解決方案吧~

艾美捷 Cell Biolabs丨磷酸化抗體用：PhosphoBlocker封閉液。

艾美捷 Cell Biolabs丨PhosphoBlocker封閉液特點：

1.與奶粉，血清，BSA相比，更卓越的封閉效果

2.同時，可作為抗體稀釋液使用，無需單獨購買

3.增強低水平的磷蛋白信號而不增加背景

4.在Western Blot期間保留磷蛋白抗原

5.易于使用的預(yù)混合干混合物

艾美捷 Cell Biolabs丨PhosphoBlocker 效果對比：

Fig. A549細胞裂解液，檢測磷酸化-p38蛋白.

Cell也在用的磷酸化抗體用封閉液：

Orthofer, Michael, et al. "Identification of ALK in Thinness." Cell181.6 (2020): 1246-1262.

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