氧化氮（NO）在神經(jīng)傳遞、血管調(diào)節(jié)、免疫等方面起著重要作用反應(yīng)與細(xì)胞凋亡。由于NO迅速轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽（NO2-)以及硝酸鹽(NO3)-),亞硝酸鹽和硝酸鹽的總濃度用作NO的定量測(cè)量生產(chǎn)。

艾美捷 BioVision 氧化氮熒光檢測(cè)試劑盒可提供準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)結(jié)果在個(gè)簡單的兩步過程中方便地測(cè)量總硝酸鹽/亞硝酸鹽濃度。

在步中，硝酸鹽通過硝酸還原酶轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽。第二步，亞硝酸鹽與熒光探針DAN（2，3-二氨基萘）反應(yīng)。NaOH提高了反應(yīng)速率熒光產(chǎn)率。熒光強(qiáng)度與總氧化氮生成量成正比。使用培養(yǎng)基、血漿和組織勻漿對(duì)試劑盒進(jìn)行了測(cè)試。

計(jì)算方法：

1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：繪制熒光與硝酸微微摩爾。

2.測(cè)定樣品硝酸鹽和亞硝酸鹽濃度：

圖：在硝酸還原酶存在和不存在的情況下進(jìn)行亞硝酸鹽、硝酸鹽測(cè)定。分析結(jié)果如下：根據(jù)試劑盒方案，在步驟5將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽1小時(shí)。

氧化氮熒光檢測(cè)試劑盒重組：

1、分析緩沖液：分析緩沖液可隨時(shí)使用。在4°C下儲(chǔ)存。

2、酶輔因子：與110μl dH2O重組，制成10 mM儲(chǔ)備溶液。等分并在-20°C下儲(chǔ)存。冷凍/解凍時(shí)間應(yīng)限制為1次。適當(dāng)稀釋部分10X，以制備1 mM工作溶液。使用時(shí)請(qǐng)保持在冰上。工作溶液可在4℃下儲(chǔ)存6-8小時(shí)。

3、增強(qiáng)子：用1.2毫升的分析緩沖液重組。在使用過程中保持冰上狀態(tài)。儲(chǔ)存在-20攝氏度。

4、硝酸還原酶：用1.2毫升分析緩沖液重新組合。等分所需數(shù)量并儲(chǔ)存在-20°C下。使用過程中請(qǐng)保持在冰上。冷凍/解凍時(shí)間應(yīng)限制為1次。

5、硝酸鹽/亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品：用1.0 ml分析緩沖液重新配制，旋渦產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)10毫米。不使用時(shí)，在4°C下保存（不要冷凍�。Ｖ亟M的標(biāo)準(zhǔn)品在4°C下儲(chǔ)存4個(gè)月后穩(wěn)定。

6、DAN探針和氫氧化鈉：隨時(shí)可用。在4°C下儲(chǔ)存。

相關(guān)研究工具：

1.氧化氮比色分析試劑盒

2.谷胱甘肽熒光和比色檢測(cè)試劑盒

3.乳酸、丙酮酸、NADH/NAD、葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖分析試劑盒。