中文名稱Cas9 核酸酶純化 Lentifect 慢病毒顆粒

供應商GeneCopoeia

產品貨號LPP-CP-LvC9NU-01-100

產品報價￥4500/100uL

 

背景資料&產品描述：

Cas9核酸酶克隆表達按照人類密碼子優(yōu)化過的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表達一個Cas9 D10A 切口酶基因。該切口酶是一個Cas9突變體，第10位氨基酸從野生型的天冬氨酸突變成了丙氨酸。

 

CRISPR-Cas9體系是由sgRNA和Cas9核酸酶構成的DNA靶向識別剪切復合體。sgRNA識別一段20bp、3端緊接著5＇-N-G-G-3＇ PAM位點的DNA靶序列，Cas9核酸酶在該靶序列上生成DNA雙鏈斷裂（DSB）。DNA雙鏈斷裂（DSB）會被細胞的非同源末端連接（NHEJ）或同源重組（HR）機制修復。NHEJ機制容易在修復的斷裂位點引入插入/缺失突變，造成閱讀框移碼而產生基因敲除的效果。同源重組（HR）需要細胞內同時存在一段帶有靶點同源序列的供體DNA作為修復模板，我們可以通過對供體DNA進行設計，在眾多實驗體系中實現(xiàn)基因敲除或者敲入突變修飾、報告基因等等一系列基因組修飾。

 

Cas9 D10A切口酶跟野生型的Cas9一樣，也使用sgRNA識別靶序列。但Cas9 D10A切口酶在靶序列上生成的是單鏈切口而非雙鏈斷裂。單鏈切口通常會由NHEJ和HR以外的機制完美地修復。但通過設計一對定向正確的sgRNA分別識別靶點兩側的DNA雙鏈，我們可以誘導Cas9 D10A分別在靶點兩側的DNA雙鏈上各生成一個單鏈切口，構成一個雙鏈斷裂（DSB），進而誘導NHEJ或HR修復機制。這種雙切口策略常被用在要求低脫靶率的實驗設計中。

 

CRISPR-Cas9體系的RNA-DNA識別機制為基因組工程研究提供了一項簡便而強大的工具。該體系其中一個*重要的優(yōu)勢是Cas9蛋白可在多個不同的gRNA的引導下同時靶向多個基因組位點。

 

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